[发明专利]检测人血液中1,5-脱水山梨醇的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验技术领域，具体涉及一种检测人血液中1,5-脱水山梨醇的试剂盒。

背景技术

糖尿病属于临床常见病、多发病，原因是胰岛素分泌不足引起，血液中1，5-脱水山梨醇(1，5-AG)与葡萄糖(GLU)、糖化血红蛋白(HbAlc)、糖化白蛋白(GA)呈显著的负相关。有资料表明，血浆葡萄糖(GLU)＞8.3mmol/L者，无一例伴有高水平的血浆1，5-脱水山梨醇(1，5-AG)。

1，5-脱水山梨醇(1，5-AG)与现有的糖尿病指标均呈现出显著的负相关，血液中1，5-脱水葡萄糖醇的减少程度与糖尿病的严重程度显著相关。1，5-脱水葡萄糖醇(1，5-AG)与其他指标最显著的区别是反映糖尿病病情变化的周期不同，血糖(GLU)反映病人当时血糖状况，糖化白蛋白(GA)反应病人半个月内血糖的平均状况，糖化血红蛋白(HbAlc)反映病人最近2～3个月左右的血糖平均水平，而1，5-脱水葡萄糖醇(1，5-AG)可以反映近几天至1周的平均血糖水平。

测定1，5-脱水山梨醇有高效液项色谱、微柱层析法、化学发光法等。这些方法比较准确，但操作费事难以批量检测，并且这些方法只能现配现用，不能长期保存。而酶法测定由于其无污染，并可试用与生化仪，操作简单等特点，有利于大规模推广。目前国内外主要采用酶法测定1，5-脱水山梨醇(1，5-AG)，主要有氧化酶法与脱氢酶法两种方法。氧化酶法的原理为，通过吡喃糖氧化酶(PROD)催化1，5-脱水山梨醇(1，5-AG)生成1，5-脱水果糖和H₂O₂，H₂O₂在过氧化物酶的作用下使4-AAP和TOOS反应生成醌类有色物质。脱氢酶法的原理为：1，5-脱水山梨醇在ADP依赖性己糖激酶(ADP-HK)的作用下生成AG-6磷酸(AG-6-P)。AG-6-P再和NADP进行反应，生成 NADPH。NADPH具有还原性，和显色剂作用生成显色物质。但目前市场上的酶法试剂盒存在着稳定性差，易受葡萄糖、胆红素、抗坏血酸、血脂等内源性干扰。

发明内容

本发明针对现有技术的上述不足，提供一种能有效防止葡萄糖、胆红素、抗坏血酸、血脂等内源性干扰，稳定性好的检测人血液中1,5-脱水山梨醇的试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种检测人血液中1,5-脱水山梨醇的试剂盒，该试剂盒包含试剂1和试剂2，试剂1和试剂2中的组分和含量包括：

试剂1：

试剂2：

作为优选，本发明上述的试剂盒，其中试剂1和试剂2中的各组分和含量包括：

试剂1：

试剂2：

本发明上述的缓冲液为磷酸缓冲液，Tris-HCl缓冲液，MES(2-(N-吗啉)乙磺酸)，MOPS(3-(N-吗啉基)丙磺酸)，HEPES(羟乙基哌嗪乙硫磺酸)中的一种。

本发明所述表面活性剂为SDS(十二烷基硫酸钠)，吐温，曲拉通，司班，Brij35中的一种。 

本发明所述稳定剂为海藻糖，蔗糖，甘露醇中的一种。

本发明所述防腐剂为叠氮钠，proclin300，G418(遗传霉素)，苯甲酸钠中的一种。

本发明还提供一种利用上述试剂盒测定血液中1，5-脱水山梨醇的方法，该方法是依据氧化酶法为基础，利用吡喃糖氧化酶(PROD)催化1，5-脱水山梨醇(1，5-AG)生成1，5-脱水果糖和H₂O₂，H₂O₂在过氧化物酶的作用下使4-AAP和TOOS反应生成醌类有色物质。利用比色分析原理可以得出血液中1，5-脱水山梨醇(1，5-AG)水平；

其原理示意如下：

本发明所述的缓冲液可以为磷酸缓冲液，Tris-HCl缓冲液，MES，MOPS，HEPES中的一种，经试验证明，其在合适的浓度范围内均有良好的反应，例如当缓冲液的浓度在20～200mM之间时，其能够提高合适的缓冲能力，同时又有较高的酶活反应。另外对于缓冲液的pH值，通过试验发现，在pH处于5.0～9.0之间时，酶处于合理的pH范围中，其稳定性好，试剂盒的灵敏度高。