[发明专利]一种沙门氏菌的分子检测方法及其应用

权利要求书

1.一种沙门氏菌的分子检测方法，其特征在于，采用单引物等温扩增方法，以沙门氏菌特异性invA基因特异序列为靶序列，SYBER GreenⅡ为荧光染料，实时荧光检测仪检测扩增的实时荧光信号。

2.根据权利要求1所述的一种沙门氏菌的分子检测方法，其特征在于，其包括如下步骤：

（1）取含沙门氏菌的待检样品，提取基因组DNA；

（2）建立实时荧光单引物等温扩增的反应体系：

建立沙门氏菌的实时荧光单引物等温扩增25 μL反应体系：组合引物浓度为70μmol/ L、Blocker浓度为10μmol/ L、Mg²⁺浓度为5.0 mmol/L、dNTPs浓度为2.5 mmol/L、Bst DNA聚合酶使用量为20U、RNase H酶使用量为2.5U、Ribolock Rnase Inhibitor的添加量为32U、SYBER GreenⅡ使用量为0.3μL，其余用DEPC水补足；

所述SYBER GreenⅡ为300倍稀释；

将DNA模板、组合引物、Blocker及反应缓冲液的混合液经99℃，90s处理后降温至60℃，迅速加入RNase H和Bst DNA聚合酶，在实时荧光定量PCR仪上56℃ 反应30min，反应过程中实时监测荧光信号；

（3）检测分析：分析检测数据。

3.根据权利要求2所述的一种沙门氏菌的分子检测方法，其特征在于，所述引物选用UGUUGUCUU-CTCTATTGTCAC，5’端9nt碱基为RNA序列，3’端12nt碱基为DNA序列；Blocker选用GGAAAGGGAAAGCC，3’端用生物素修饰，中间随机加上三个IXNA修饰。

4.根据权利要求3所述的一种沙门氏菌的分子检测方法，其特征在于，所述IXNA包括A，C，G，T，U，mC六种堿基中的一种。

5.根据权利要求2所述的一种沙门氏菌的分子检测方法，其特征在于，步骤（1）提取基因组DNA方法采用水煮法。

6.根据权利要求2所述的一种沙门氏菌的分子检测方法，其特征在于，步骤（1）提取基因组DNA方法采用商业化试剂盒法。

7.一种权利要求1-6任一项所述的方法食品中沙门氏菌检测中的应用。