[发明专利]提高鸡精液品质方法及其引物、试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及优质鸡精液品质密切相关基因诊断试剂盒及其使用方法，属于分子生物学技术领域，应用于公鸡的早期筛选。

背景技术

人类对家禽生产性状从无意识到有意识选择已经历几千年的历史，而从表型选择到遗传基础的研究和基因型选择这一过程仅是近几十年的事情。优秀的种公鸡是提高经济效益的关键之一，一方面可降低生产成本，特别是种鸡的饲养成本。采取人工授精可使鸡的配种比例提高3倍左右，可以减少3/4的种公鸡，这可以较大的降低成本，另一方面可大大提高优秀种公鸡的利用率，提高生产效率和产品品质。当前对公鸡的选择依然采用常规选择，虽然常规育种方法在家禽遗传改良中取得一定进展，但它对数量性状的选择要在个体生长发育到一定时期，育种周期长，费用高。优质鸡精液品质性状为数量性状，仅以个体或亲属表型值进行个体选择结果不十分可靠，因此，需要遗传标记进行辅助选择。随着人类基因组测序工作的完成，SNP的筛选及检测正式成为研究者广泛关注的焦点。该技术具有特异性高、检测快速、通用性强、适用范围广、成本低廉等特点，在复杂疾病的基因定位、关联分析、个体疾病易感性分析与药物基因组学等的研究中发挥着越来越重要的作用。

经过对现有国内外文献和专利的检索，至今未见有VIPR1、VIPR2和DAR2基因多态性位点与鸡精液品质性状相关性的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高鸡精液品质方法及其引物、试剂盒及其使用方法，本发明方法效果显著，检测方法简单快捷，且不受外界环境的影响。

本发明提供了一种鸡精液品质密切相关基因用引物，包括血管活性肠肽受体1(VIPR1)基因PCR扩增的上下游引物混合物、血管活性肠肽受体2(VIPR2)基因PCR扩增的上下游引物混合物、多巴胺受体2(DAR2)基因PCR扩增的上下游引物混合物；

所述血管活性肠肽受体1(VIPR1)基因PCR扩增的上下游引物混合物中上游引物序列：5’-gctcccgcagatatatggaa-3’；下游引物序列：5’-tgggaggagacaaaacaaca-3’；

所述血管活性肠肽受体2(VIPR2)基因PCR扩增的上下游引物混合物的上游引物序列：5’-gtgttcacttttgggcacct-3’；下游引物序列：R:5’-cagccaaaaacattggtgtg-3’；

所述多巴胺受体2(DAR2)基因PCR扩增的上下游引物混合物，上游引物序列：5’-gttggggagtggaggttcag-3’；下游引物序列：5’-attgggctggagatggcaaa-3’。

本发明还提供了一种利用复合基因型提高鸡精液品质的方法，提取待测样本的鸡基因组DNA，待测样本的鸡基因组DNA基因序列经权利要求1所述的鸡精液品质密切相关基因用引物进行PCR扩增SNP位点所在片段，扩增得到192、250和270 bp的目的片段，目的片段先进行PCR-SSCP检测后，凝胶电泳后用银染显色，分别得到DNA的SSCP图谱，根据3个图谱中的带型选择选择TT/GG/OQ三基因复合基因型的个体，即在73352、36127、201和208处分别为T、G、T和A/G等位基因的个体。

优选地，所述PCR扩增SNP位点所在片段的反应体系20μL：在PCR反应管中加入上下游引物混合物2.0μL、PCR反应试剂3μL、50ng/μL DNA模板1.0μL，加超纯水至20μL，充分混匀后短暂离心。

优选地，所述PCR扩增的反应条件为先94℃变性5min；再经过35个循环，每个循环包括94℃30s、60℃15s、72℃30s；然后72℃延伸10min、最后4℃保存。

优选地，所述PCR-SSCP检测包括：2μL PCR扩增产物加入7μL上样缓冲液，98℃变性10min，然后冰浴5min；3对引物的聚丙烯酰胺凝胶浓度为10％，凝胶交联度为29：1，电压都为150V，过夜电泳。

此外，本发明又提供了一种鸡精液品质三基因联合效应诊断试剂盒，包括盒体和盒体内的衬垫，衬垫的孔腔内设有所述的血管活性肠肽受体1 VIPR1基因PCR扩增的上下游引物混合物P、血管活性肠肽受体2 VIPR2基因PCR扩增的上下游引物混合物P、所述多巴胺受体2 DAR2基因PCR扩增的上下游引物混合物P以及PCR反应试剂、超纯水、上样缓冲液；所述PCR反应试剂为10×buffer、dNTP和Taq酶的混合物。

本发明进一步提供了鸡精液品质三基因联合效应诊断试剂盒的使用方法，包括以下步骤：