[发明专利]抗链球菌溶血素O抗体的检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种医学检测试剂盒，具体讲是一种抗链球菌溶血素O抗体（ASO）的检测试剂盒。

背景技术

链球菌溶血素O（SLO）是链球菌产生的一种外毒素，它能够溶解人体血液中的红细胞，并且对多种细胞有毒性作用，当链球菌感染人体后，人体免疫系统会产生抗链球菌溶血素O的抗体，并且释放到血液中，使血液中抗链球菌溶血素O的抗体浓度升高。因此，临床上通过对人体血液中抗链球菌溶血素O抗体的浓度检测，辅助诊断由链球菌感染后引起的变态性疾病（如风湿热和肾小球肾炎）。

目前市场上，通过胶乳增强免疫比浊试剂来检测人体血清中的抗链球菌溶血素O抗体。在销售的胶乳增强免疫比浊试剂中，胶乳与抗原或抗体的交联，通常有物理吸附法和化学交联法。物理吸附法通常是靠蛋白质分子结构上的疏水基团与胶乳表面的疏水基团间的相互作用，将抗原或抗体吸附到胶乳表面。化学交联法是通过抗原或抗体与胶乳表面的化学基团反应，将抗原或抗体交联在胶乳上。此两种方法各有优缺点，物理吸附法有易于结合，不会影响抗原或抗体的活性，但特异性比较差，结合不够牢固。化学交联法有特异好，易保存，分散性良好等优点，但对抗体或抗原活性影响大。

化学交联法现已广泛应用于体外诊断试剂制备中，但是化学交联法会由于化学反应造成抗原或抗体在交联过程中活性丧失，影响试剂的灵敏度和准确度，而且经多步交联，试剂的稳定性受到大的影响，而且制备的时间时间很长。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服以上现有技术的缺点：提供一种检测灵敏度，准确度高；精密度好，检测线性宽，稳定性好；生产成本低的抗链球菌溶血素O抗体的检测试剂盒。

本发明的技术解决方案如下：一种抗链球菌溶血素O抗体的检测试剂盒，包括试剂1和试剂2，所述试剂1为促进抗体抗原特异性结合的反应液；所述试剂2由缓冲液和蛋白胶乳颗粒复合物组成；所述蛋白胶乳颗粒复合物为组合蛋白标记在聚苯乙烯胶乳颗粒上形成的复合物；所述组合蛋白由链球菌溶血素O和惰性蛋白通过化学交联而成。

所述试剂1由以下组分组成：100-400 mM Tris-HCl；5-10 mM聚乙二醇6000；1 mg/mL Proclin-300；1-20mM乙二胺四乙酸钠(EDTA)；1-10 mg/mL BSA和150mM氯化钠。

作为优选，所述惰性蛋白为小牛血清白蛋白（BSA）或酪蛋白中的一种。

作为进一步优选，所述惰性蛋白为BSA。

作为优选，所述试剂2中的链球菌溶血素O为天然抗原或重组抗原。

作用优选，所述聚苯乙烯胶乳颗粒的粒径为60-500 nm。

作为进一步优选，所述聚苯乙烯胶乳颗粒的粒径为100-200 nm。

作为优选，所述试剂2中蛋白胶乳颗粒复合物含量为1-10 mg/mL。

作为进一步优选，所述试剂2中蛋白胶乳颗粒复合物含量为1-5 mg/mL。

作为优选，通过化学交联制备所述组合蛋白的交联剂为1-?(3-?二甲氨基丙基)?-?3-?乙基碳二亚胺（EDC）、N-羟基丁二酰亚胺(NHS)或戊二醛中的一种。

蛋白胶乳颗粒复合物是先由组合蛋白上的氨基通过EDC和聚苯乙烯胶乳颗粒表面羧基反应形成化学交联，然后加入还原性物质进行反应制得。

所述还原性物质为亚硫酸钠、硫辛酸、硼氢化钾或硼氢化钠中的一种。

所述试剂1中Tris-HCl缓冲液的pH值为5.5-8.5，进一步优选为6.5-7.5。

本发明试剂盒中试剂1与试剂2的容积比为4︰1。

由于BSA稳定性好，SLO通过化学交联与BSA先结合，制得稳定性好的组合蛋白，再通过第二次化学交联把BSA标记到胶乳颗粒表面上。由于BSA蛋白分子量比SLO大，稳定性好。通过多个SLO蛋白分子和一个BSA通过化学交联组合，导致交联在BSA上的SLO的稳定性大大提高，再通过组合蛋白和胶乳颗粒的化学交联，形成SLO-BSA-胶乳颗粒复合物。

本发明以上所述SLO序列中含有多个半胱氨酸，半胱氨酸中的巯基易被氧化，导致SLO结构变化，降低试剂2稳定性。因此，在试剂2中加入还原剂可提高试剂2的稳定性。