[发明专利]一种扁桃仁蛋白的定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及扁桃仁蛋白的定量检测，尤其涉及一种扁桃仁蛋白的定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

扁桃仁，俗称巴旦木，是出产自世界各地、广受欢迎的一种坚果，富含有蛋白质、膳食纤维、维生素E，且不含胆固醇，在中国被广大消费者接受和喜爱。但是由于利益的驱使，不法食品生产者往往使用杏仁香精等添加剂制造扁桃仁蛋白饮料。造成这种乱象和质疑的根本原因在于缺少植物蛋白饮料中所含有植物蛋白的定量方法。国家标准GB 16322-2003《植物蛋白饮料卫生标准》规定植物蛋白饮料中的蛋白质含量应不低于5g/L。由于技术所限，目前只能依据凯式定氮法对其总蛋白进行定量。凯式定氮是通过测定样品中总氮的含量推算出蛋白含量。这就导致了不法分子可以三聚氰胺等高氮小分子非法添加物冒充植物蛋白，或以相对廉价的蛋白掺伪价格较高的扁桃仁蛋白。植物蛋白饮料对其总氮的测定不能真实反映添加的植物蛋白的含量或者乳蛋白含量。这不仅涉及到欺骗消费者，更严重的是掺伪过程因风味需要常添加过量的或非法的香精香料，极大威胁食品安全。

另外，扁桃仁也是一种易于致敏的过敏原。但是由于其和杏仁高度相似，往往和杏仁混淆，商家在标签上也往往遗漏或错误标示，这就给扁桃仁致敏人群造成极大的食品安全隐患。但由于DNA在热加工过程中的破坏以及两者亲源性较近，目前的PCR方法尚不能特异性区分在热加工产品中的扁桃仁和杏仁。

因此，综合上两方面所述，市场迫切需要一种能定量检测食品中扁桃仁蛋白的产品。

发明内容

为了解决现有技术中的问题，本发明提供了一种扁桃仁蛋白的定量检测试剂盒及其制备方法。

本发明提供了一种扁桃仁蛋白的定量检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

S1、单克隆抗体制备；

S2、扁桃仁prunin-1蛋白提取分离；

S3、酶联免疫检测方法建立及评估；

S4、组装定量检测试剂盒。

作为本发明的进一步改进，步骤S1包括：根据NCBI扁桃仁pruin-1的蛋白序列进行Blast比对，综合特异性，抗原性分析，合成多肽偶联钥孔血蓝蛋白作为免疫原，偶联载体蛋白牛血清白蛋白作为包被原。

作为本发明的进一步改进，步骤S1还包括：免疫原通过免疫实验动物，经过细胞融合，抗体纯化制备抗扁桃仁prunin-1蛋白单克隆抗体。

作为本发明的进一步改进，步骤S1还包括：抗体识别位点为扁桃仁prunin-1蛋白的RQGRQQGRQQQEEGR氨基酸序列。

作为本发明的进一步改进，步骤S2包括：通过液相等电聚焦，蛋白电泳等蛋白纯化系统制备扁桃仁prunin-1蛋白，以此作为试剂盒内的标准品。

作为本发明的进一步改进，步骤S3包括：建立扁桃仁蛋白酶联免疫检测方法并对其特异性、抗基质干扰能力和重复性进行评估。

作为本发明的进一步改进，步骤S3包括：将预包被扁桃仁包被原的酶标板、扁桃仁prunin-1蛋白标准溶液、辣根过氧化物酶标记扁桃仁prunin-1蛋白单克隆抗体、显色液和终止液组装为定量检测试剂盒。

本发明还提供了一种扁桃仁蛋白的定量检测试剂盒，通过如上述中任一项所述的扁桃仁蛋白的定量检测试剂盒的制备方法制备而成。

本发明的有益效果是：能够定量检测食品中扁桃仁蛋白，抗扁桃仁特征蛋白抗体针对的抗原决定簇耐热，可对扁桃仁及其相关产品进行蛋白定量检测，适用范围广，有利于消费者合法权益的保障；特异性好，灵敏度高，抗基质干扰效果好，检测结果准确性好，重复性好；样品的前处理简单，检测操作简单，试剂均以工作液的形式提供，可方便地进行大量样本的筛查。

附图说明

图1是抗扁桃仁prunin-1蛋白单克隆抗体的Western-blot图谱；

图2是扁桃仁prunin-1蛋白双向电泳蛋白图谱；

图3是扁桃仁prunin-1蛋白酶联免疫检测标准曲线。

具体实施方式

下面结合附图说明及具体实施方式对本发明进一步说明。

实施例一目标抗原的制备。

根据NCBI扁桃仁pruin-1的蛋白序列进行Blast比对，综合特异性，抗原性分析，合成多肽(氨基酸序列：RQGRQQGRQQQEEGR-Cys)偶联钥孔血蓝蛋白作为免疫原，偶联载体蛋白牛血清白蛋白作为包被原。偶联方法如下：