[发明专利]一种柴胡脱毒组培快繁的方法

权利要求书

1.一种柴胡脱毒组培快繁的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基，各培养基的组分 重量为：

①基本培养基：选用MS培养基，蔗糖25～35g/L，琼脂7～9g/L，蛋白胨3～ 8g/L，腐殖酸0.5～0.8g/L，pH5.8～6.5；

②诱导培养基：MS中添加6-BA0.5～1.5mg/L、α-萘乙酸钠0.1～0.2mg/L、 NAA0.15～0.5mg/L以及维生素B20.001～0.002mg/L；

③愈伤组织分化培养基：MS中添加6-BA2.5～3.0mg/L和NAA0.2～0.3mg/L 以及维生素B20.001～0.002mg/L；

④增殖培养基：MS中添加6-BAl.0mg/L和NAAO.3mg/L；

⑤生根培养基：1/3MS中添加NAAO.1mg/L和卡拉胶0.5～0.8g/L；

2)外植体的选取与灭菌：取柴胡的种子，经灭菌处理，作为脱毒组培用的 外植体；

3)诱导培养：将步骤2)灭菌处理后的种子接种在诱导培养基上，直接形成 无根组培苗或先形成愈伤组织，再将愈伤组织移植至分化培养基诱导出丛芽， 形成无根组培苗和珠芽；

4)增殖培养：将步骤3)直接形成的无根组培苗或先形成愈伤组织，再经分 化培养基诱导形成的无根组培苗和珠芽接种在增殖培养基上，诱导出丛芽，形 成无根组培苗和珠芽；

5)生根培养：将步骤4)增殖形成的无根组培苗和珠芽接种在生根培养基中 进行生根培养；

6)移栽：当步骤5)的生根组培苗生长至4～7cm以上、生根珠芽0.3～0.7cm 以上，移栽基质培养至成苗；

7)病毒检测：利用RT-PCR扩增技术，构建其基因组序列克隆，原核表达制 备病毒特异性的抗血清，建立ELISA检测技术进行柴胡大豆花叶病毒、芋花叶 病毒、马蹄莲花叶病毒的检测。

2.如权利要求1所述的一种柴胡脱毒组培快繁的方法，其特征在于：所述 的柴胡种子是生长健壮，无病虫害，籽粒饱满当年采收的新种子，把种子放到 55℃的水中不断搅拌至室温，把漂在上面的秕籽捞去，然后洗净沉底的饱满籽 粒。

3.如权利要求1所述的一种柴胡脱毒组培快繁的方法，其特征在于：所述 的灭菌处理是经75％酒精浸泡0.5～l.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌20～30min， 最后用无菌水冲洗3～5次。

4.如权利要求1所述的一种柴胡脱毒组培快繁的方法，其特征在于：所述 的移栽基质是泥炭：珍珠岩：蛭石：腐殖土按体积比3：1：1：1.5配制而成。