[发明专利]一种疏水色谱纯化激肽释放酶的方法

权利要求书

1.一种疏水色谱纯化激肽释放酶的方法，该方法通过疏水色谱等现代生物分离技术，提高了纯化激肽释放酶的效率，保持激肽释放酶的效价稳定。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：以激肽释放酶原为原料，依次经过离子交换层析、盐析、超滤、热原处理、透析、疏水色谱、冻干等工序纯化得到激肽释放酶。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述纯化工艺包括如下步骤：

1）将激肽释放酶原用醋酸缓冲液溶解，离心，上清液加入离子交换树脂，搅拌、吸附、漂洗、洗脱；

2）调节pH值后加入固体硫酸铵进行盐析，静置过夜，过滤，收集滤饼；

3）加入磷酸盐缓冲液搅拌调节pH值，超滤；

4）超滤液加入磷酸钠溶液和醋酸钙溶液后，调节pH搅拌，离心，弃沉淀物；

5）取上述滤液置于于透析袋中，透析4～6天；

6）疏水色谱，用2种洗脱液进行洗脱，最终收集含激肽释放酶活性峰的洗脱液，-20℃保存；

7）调节pH值，装盘、冻干，得激肽释放酶。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于离子交换树脂选AmheriteCG-50,并且m(树脂)：m（粗制品）=50：1。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于离子交换层析选用洗脱液为0.01-0.3mol/L，PH3-8的NaCL溶液。

6.如权利要求3所述的方法，其特征在于盐析工序中每升提取液中加入500g硫酸铵。

7.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述疏水色谱快胶柱包括：Butyl-Sepharose 2B FF,Butyl-Sepharose 4B FF,Butyl-Sepharose 6B FF，Butyl-Sepharose CL-2B FF,Butyl-Sepharose CL-4B FF,Butyl-Sepharose CL-6B FF;。

8.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述疏水色谱条件为：平衡液选用含0.5-3mol/L (NH₄)₂SO₄的0.01-0.3mol/L，PH3-8的NaAc-HAc缓冲液,流速控制在1~5mL/min左右，洗脱液选用0.5-3mol/L 的(NH₄)₂SO₄溶液和不含(NH₄)₂SO₄平衡缓冲液。

9.如权利要求1～7所述的方法，其特征在于：疏水色谱纯化所得激肽释放酶效价高达1500～1800iu/mg。