[发明专利]一种低分子肝素的纯化方法

权利要求书

1.一种低分子肝素的纯化方法，其特征在于：将制得的低分子肝素通过亲和色谱的方法得到高纯度的低分子肝素产品。

2.根据权利要求1所述的制备高纯度低分子肝素的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

制备亲和树脂：将壳聚糖在水中进行悬浮溶胀24h，用NaOH溶液调节pH8.0-9.0，加入戊二醛溶液反应2h，抽滤，再用水洗净戊二醛至无味，在低温条件下加入凝血酶，反应5h，反应终止后加入NaCl溶液洗去未偶联的配基，并用水洗至pH为中性，用亲和柱平衡液浸泡15min后，脱气，再装柱；

将低分子肝素用pH为7.5 Tris-HCl缓冲液溶解;

将溶解液上柱进行吸附;

加入Tris-HCl缓冲液洗涤;

用氯化钠溶液洗脱，收集洗脱液;

加入乙醇进行低温沉淀，得到沉淀物;

真空干燥得到高纯低分子肝素产品。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，戊二醛浓度20%-30%；加入凝血酶的量为壳聚糖的0.05%-2% 。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（3）中，溶解用的Tris-HCl缓冲液体积约为低分子肝素的1%-3%。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述吸附柱为亲和层析柱。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述亲和层析柱包括：CM-Sephadex A-25,CM-Sephadex A-50,CM-Sephadex C-25,CM-Sephadex C-50，SP-Sepharose 2B,SP-Sepharose 4B,SP-Sepharose 6B，SP-Sepharose CL-2B,SP-Sepharose CL-4B,SP-Sepharose CL-6B。