[发明专利]一株深绿木霉TA-9菌株及其在水稻病害防控中的应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物领域，涉及一株深绿木霉菌(Trichoderma atroviride)TA-9及其在水稻病害防控中的应用。

技术背景

目前，使用化学农药是农作物病害防治的主要措施之一。化学农药在提高农产品产量和品质方面起到了重要作用，但大量使用化学农药也导致了如环境污染、生态破坏、农产品农药残留和病原菌产生抗药性等一系列问题。充分利用综合防控措施对植物病害进行防治，减少化学农药使用，已成为植保工作者的共识。利用环境中的有益微生物防控植物病害是热点研究方向之一。木霉作为植物病害生防因子一直收到普遍关注。木霉常见于土壤中，是土壤微生物的重要群落，对多种植物病原真菌，如立枯丝核菌、腐霉、疫霉、轮枝菌、镰刀菌等具有拮抗和寄生作用，目前已形成商业化木霉生防制剂，如，美国的Topshield(哈茨木霉T22)、以色列的Trichodex(哈茨木霉T39)、新西兰的木霉制剂Trichodry和Trichoflow等。鉴于木霉菌来源广泛，对不同植物病原菌的拮抗和寄生能力有不同，其应用植物对象也有差异，因此仍需针对某些重要植物病害进行木霉菌株的筛选和开发应用。

水稻在其生长季受多种真菌病害的威胁。如，随着优质高产水稻品种在我国大面积推广种植，为水稻纹枯病和稻曲病等真菌病害提供了较好的流行发生条件，病害发生呈现上升趋势。其中水稻纹枯病为我国水稻上的主要病害之一，目前抗病育种中尚缺乏有效的抗病基因。水稻纹枯病为土传病害，病原菌为立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)，病原菌先侵入茎基部叶鞘随后扩展。生产上主要使用微生物源杀菌剂井冈霉素和三唑类化学杀菌剂如丙环唑、苯醚甲环唑、己唑醇等进行防治。其中，井冈霉素长期超量单一使用防治水稻纹枯病，已有部分地区水稻纹枯病菌产生抗药性且防治效果有所下降的报道。

稻曲病在我国各大稻区均有发生，已成为水稻上的重要病害之一，其病原菌为稻绿核菌(Ustilaginoidea virens)，可侵入谷粒形成稻曲球，并产生对人畜有毒的毒素，降低水稻产量和品质，影响食品安全。稻曲病防治最佳时期为水稻破口前5～7天，目前水稻生产上也长期主要使用井冈霉素进行防治。

生物防治作为一项重要的病害防控措施已得到社会的广泛认可和关注。在水稻病害防治领域，生防制剂仍较缺乏，更多高效、安全、稳定的生物农药亟需开发，而木霉菌作为一类公认的具有生防潜力的真菌具有较好的应用开发前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种深绿木霉，它可以作为生物农药防治多种水稻病害。

本发明的目的是通过下列技术措施实现的：本发明深绿木霉(Trichoderma atroviride)TA-9菌株是从南京市200份被真菌寄生的水稻稻曲球样品中分离获得，已于2014年9月23日被中国微生物菌株保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，其保藏编号为CGMCC No.9698，以上所述木霉菌菌株的ITS序列如SEQ ID No.1所示。拉丁学名为：Trichoderma atroviride TA-9。

菌株培养特性记载为：在PDA培养基上最适生长温度为25-30℃，最高生长温度为37℃。30℃培养2d，菌落直径可达到6.1cm。在PDA上培养4d，中央可形成绿色的分生孢子产孢区域，有椰子气味。

菌株形态特征包括：分生孢子梗的可育延伸物没有或很少产生，没有不育的菌毛；分生孢子梗典型分枝方式为单侧分枝，分枝角度近似90°。瓶梗直或弯曲，常为单生，2-4个则呈旋涡状排列。分生孢子绿色，表面光滑，球形或亚球形，3.0～5.0μm×2.3～4.0μm，长宽比值为0.8～1.6，无明显的脱落痕迹。

本发明采集江苏省散落稻田中的稻曲球，半埋于湿润的石英砂中，28℃培养15-20d，分离稻曲球上的寄生真菌，分离纯化菌株，然后依次与立枯丝核病菌(Rhizoctonia solani)和稻绿核菌(Ustilaginoidea virens)进行离体对峙病原菌抑制试验。经过反复筛选，最终选出对立枯丝核菌和稻绿核菌具有强寄生作用、可高产厚垣孢子和分生孢子的木霉菌菌株，编号为TA-9。通过菌落、分生孢子梗、瓶梗、分生孢子等形态特征以及内转录基因间区核苷酸序列(ITS)的检测，确定该菌株为深绿木霉(Trichoderma atroviride)。

深绿木霉TA-9的厚垣孢子和分生孢子液体发酵物的获得，包括如下步骤：

(1)菌株活化：将深绿木霉TA-9移至PDA斜面培养基上，在28-30℃下培养7d；