[发明专利]一种慢性肾病诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于疾病检测技术领域，具体涉及一种慢性肾病诊断试剂盒。

背景技术

成纤维细胞生长因子23(FGF23)是FGFs超家族中的一员，它通过抑制磷的重吸收及增加磷的外分泌，在慢性肾病病人早期磷稳态的维持中发挥重要作用(J Am Soc Nephrol.2007:18:1637-1647)。《美国肾脏杂志》及《新英格兰》相继报道，慢性肾病病人FGF23浓度升高先于磷代谢异常；FGF23表达水平与慢性肾病的恶化及晚期透析治疗病人的死亡率成独立相关。因此，FGF23成为了肾功能早期诊断的重要标志物。由于目前临床使用的生物标物-肌氨酸酐存在着准确性低、特异性不高的缺陷，而且一旦查出肌氨酸酐水平超标，多数病程已经达到中晚期。因此，开发新的慢性肾病诊断试剂－FGF23单克隆抗体试剂盒具有重要的临床应用价值。

发明内容

本发明目的在于提供一种慢性肾病诊断试剂盒，为慢性肾病早期诊断提供一种简便易行的方法，为慢性肾病的检测和治疗提供了新方法与途径。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一种慢性肾病诊断试剂盒，包括FGF23单抗隆抗体、生物素标记试剂Sulfo-NHS-LC-Biontin、缓冲溶液、casein盐溶液、链霉素亲和素和底物TMB。

本发明试剂盒使用pH 7.00.1M PBS作为包被缓冲溶液，检测样品的包被体积为100μl，包被浓度为2μg/ml。

本发明试剂盒FGF23抗体与生物素标记试剂Sulfo-NHS-LC-Bio ntin标记条件为重量比为1:5～1:12，混合后的浓度为2μg/ml。

本发明试剂盒所述的casein盐溶液为FGF23、检测抗体和链霉素亲和素的稀释液，链霉素亲和素的稀释倍数是1:3000。

本发明试剂盒所述的链霉素亲和素与底物的作用时间为10分钟。

本发明试剂盒FGF23的最低检测限值为10pg/ml，检测线性范围是2400pg/ml～10pg/ml。

本发明的有益效果为为慢性肾病的早期检测提供了一种体外检测试剂盒，该试剂盒对FGF23临床检测的灵敏度达到10pg/ml，比常规单抗提高了10倍的灵敏度，对于慢性肾病的早期诊断具有重要意义。

附图说明

图1是本发明实施例吸光度值与样品浓度间的线性关系。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。

实施例1FGF23检测试剂盒的制备

利用FGF23-Fc抗原免疫小鼠，获得杂交瘤细胞阳性FGF23抗体克隆，针对其中的1276株克隆进行了筛选，检测了他们对FGF23蛋白的结合特异性，筛选得到编号278、6B12和6H1的三种抗体。

利用前期筛选的三株FGF23单克隆抗体278，6B12和6H1进行FGF23 ELISA检测试剂盒检测条件的优化。

1)2mg/ml 6B12和6H1各100μl按1:20、1:10、1:5室温进行30分钟生物素化反应，反应结束用等体积1％BSA结束反应。用包被抗体278，进行包被，3ng/ml FGF23三倍梯度稀释，生物素化抗体进行检测，考察生物素化效率，生物素试剂选择NHS-PEG4-Biontin(Lot#ND 172078)，具体情况见表1：

表1 生物素标记比率优化

由表1可知抗体6B12进行生物素标记的最佳比例是1:5；6H1进行生物素化标记的最佳浓度是1:10。

根据以上实验结果，围绕最佳生物素化条件，进行生物标记条件优化，6B12以1:8、1:6、1:5、1:4进行生物素化反应；6H1以1:12、1:10、1:8进行标记。

表2 生物素标记比率优化

表2研究数据表明：抗体6B12进行生物素标记的最佳比例是1:8；6H1进行生物素化标记的最佳浓度是1:10。