[发明专利]分离的编码CLN5突变体的核酸及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及分离的编码CLN5突变体的核酸及其应用，更 具体地，涉及分离的编码CLN5突变体的核酸、分离的多肽、筛选易患神经元蜡样脂褐质沉 积症的生物样品的系统、用于筛选易患神经元蜡样脂褐质沉积症的生物样品的试剂盒、构建 体、重组细胞以及构建药物筛选模型的方法。

背景技术

神经元蜡样脂褐质沉积症在相对常见的进行性神经退行性的青少年疾病，其特征主要为 皮质神经元的快速死亡以及神经和外围组织自发荧光高电子密度的胞内脂质(autofluorescent lipopigmentmaterial)的积累，积累的过程主要与细胞逐渐丢失有关，进而影响到大脑和小 脑的皮质以及皮层下灰色的核(subcorticalgreynuclei)。CLN5基因上的突变多出现在严重 的常染色体遗传的迟发性小儿神经元蜡样脂褐质沉积症，发病年龄多为4到7岁。临床表现 主要为视觉下降，小脑性共济失调，耐药渐进，肌肉阵挛性癫痫，行为障碍，精神衰退和早 逝。神经元蜡样脂褐质沉积症多为常染色体隐性遗传，但也有少数报道符合常染色体显性遗 传，多发于幼儿期和青春期。不到5％的病例发生在成年期，多伴有库夫斯病(Kufsdisease)， 这种情况最难被诊断出来。据报道，目前已知的神经元蜡样脂褐质沉积症大约有13种致病 基因，和大约400种突变。

因此，仍有待进一步发现新的CLN5突变体。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提 出一种有效筛选神经元蜡样脂褐质沉积症生物样品的方法。

需要说明的是，本发明是基于发明人的下列工作而完成的：

发明人采用新一代的全外显子组测序技术，针对一个神经元蜡样脂褐质沉积症(neuronal ceroidlipofuscinosis，NCLs)患病家系进行了全基因组外显子组测序分析，发现神经元蜡样脂 褐质沉积症一个致病基因CLN5的新的纯合突变c.935G>A(p.Ser312Asn)。本发明研究的是 一种成年期晚发神经元蜡样脂褐质沉积症，因为它的初期症状比较复杂伴有隐性遗传的小脑 性共济失调，因此基因层面的诊断是十分重要的。与传统的连锁分析、候选基因关联分析技 术相比，发明人采用的外显子组测序技术针对基因组内编码蛋白质的外显子区域，目标集中， 测序深度和精度更高。

因而，根据本发明的第一方面，本发明提供了一种分离的编码CLN5突变体的核酸。根 据本发明的实施例，所述核酸与SEQIDNO：1相比，具有c.935G>A突变。发明人惊奇的 发现，该突变体与神经元蜡样脂褐质沉积症的发病密切相关，从而通过检测该突变体在生物 样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易患神经元蜡样脂褐质沉积症，根据本发明 的实施例，该突变体的核酸进一步丰富了CLN5基因的致病突变图谱，更深入阐明了神经元 蜡样脂褐质沉积症的分子发病机制，为神经元蜡样脂褐质沉积症的早期致病基因筛查和干预 治疗提供科学依据。

根据本发明的第二方面，本发明还提供了一种分离的多肽。根据本发明的实施例，与 SEQIDNO：3相比，所述分离的多肽具有p.Ser312Asn突变。具体地，致病基因CLN5的 新的纯合突变c.935G>A，导致编码的氨基酸发生突变，即p.Ser312Asn。通过检测生物样品 中是否表达该多肽，可以有效地检测生物样品是否易患神经元蜡样脂褐质沉积症。

根据本发明的第三方面，本发明还提供了一种筛选易患神经元蜡样脂褐质沉积症的生物 样品的系统。根据本发明的实施例，该系统包括：核酸提取装置，所述核酸提取装置用于从 所述生物样品提取核酸样本；核酸序列确定装置，所述核酸序列确定装置与所述核酸提取装 置相连，用于对所述核酸样本进行分析，以便确定所述核酸样本的核酸序列；判断装置，所 述判断装置与所述核酸序列确定装置相连，以便基于所述核酸样本的核酸序列与SEQID NO：1相比，是否具有c.935G>A突变，判断所述生物样品是否易患神经元蜡样脂褐质沉积 症。发明人惊奇地发现，利用该系统可以对神经元蜡样脂褐质沉积症进行基因层面的检测， 有助于更准确的筛选易患神经元蜡样脂褐质沉积症的生物样品。