[发明专利]禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法在审
| 申请号： | 201410811399.1 | 申请日： | 2014-12-22 |
| 公开（公告）号： | CN104404005A | 公开（公告）日： | 2015-03-11 |
| 发明（设计）人： | 王寿山;李亚杰;郁宏伟;杨保收;梁武 | 申请（专利权）人： | 天津瑞普生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/861 |
| 代理公司： | 天津滨海科纬知识产权代理有限公司 12211 | 代理人： | 杨慧玲 |
| 地址： | 300308 天津市滨海新区空港*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 禽流感 病毒 ha 基因 重组 制备 方法 | ||
1.一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法，该方法包括以下步骤：
1)将具有禽流感病毒HA基因的片段连接到腺病毒穿梭质粒上，将连接产物导入大肠杆菌中扩增，而后提取重组腺病毒穿梭质粒；
2)将步骤1)提取得到的重组腺病毒穿梭质粒经单酶切后导入含有腺病毒骨架质粒的大肠杆菌中进行同源重组，而后提取重组腺病毒质粒；
3)将步骤2)提取得到的重组腺病毒质粒线性化后转染293细胞，包装，即得到禽流感病毒HA基因重组腺病毒；
其特征在于：所述具有禽流感病毒HA基因的片段是连接有CAG启动子的禽流感病毒HA基因片段。
2.根据权利要求1所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法，其特征在于所述连接有CAG启动子的禽流感病毒HA基因片段是通过以下方法制备的：将禽流感病毒HA基因片段与pCAGGS载体连接，而后将连接产物导入大肠杆菌扩增，而后提取重组质粒，而后酶切得到CAG-HA基因片段。
3.根据权利要求2所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法，其特征在于所述禽流感病毒HA基因有两种，分别是H5N1型禽流感病毒HA基因和H9N2型禽流感病毒HA基因，先完成其中一种禽流感病毒HA基因片段与pCAGGS载体的连接，而后再与另一种禽流感病毒HA基因片段连接。
4.根据权利要求1～3任一项所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法，其特征在于步骤1)所述腺病毒穿梭质粒是pShuttle质粒。
5.根据权利要求1～3任一项所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法，其特征在于步骤1)所述的大肠杆菌为DH5α大肠杆菌。
6.根据权利要求1～3任一项所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法，其特征在于步骤2)所述大肠杆菌为BJ5183大肠杆菌。
7.根据权利要求1～3任一项所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法，其特征在于步骤2)所述的腺病毒骨架质粒是腺病毒骨架质粒pAdEasy-1。
8.根据权利要求1～3任一项所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法，其特征在于步骤2)所述的单酶切是利用Pme I酶实现的。
9.根据权利要求1～3任一项所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法，其特征在于步骤3)所述的293细胞为AD293细胞。
10.根据权利要求1～3任一项所述的一种禽流感病毒HA基因重组腺病毒的制备方法，其特征在于步骤3)所述的线性化是利用Pac I酶实现的。
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