[发明专利]从红肉桃中分离提纯花色素苷的方法

说明书

技术领域

本发明涉及从红肉桃中分离提纯花色素苷的方法，属于食品加工技术领域。

背景技术

红肉桃是桃中最具特色的资源，是近几年研究和开发利用的重点材料。红肉桃果肉深红色，主导花色素苷成分为矢车菊素 3-葡萄糖苷。

花色素苷一方面赋予园艺产品艳丽的外观品质，花色和果色是商品价值的重要组成部分；另一方面，花色素苷积累水平与植物抵御各种生物和非生物胁迫，适应极端条件的能力密切相关；再者，花色素苷强有力的药理活性和抗氧化能力在许多研究中得到了证实，是人类和动物重要的医药资源。因此，分离制备高纯度天然花色素苷具有重要意义。

专利文献CN104098633A公开了一种从越橘中提取花色苷的方法，主要采取超滤膜分离纯化，成品花色苷含量为52～55%，花色苷的收率为43～48%，其花色苷纯度明显偏低。专利文献CN103601771A公开了一种从白刺果实中分离制备花色苷单体的方法，将白刺果实用甲酸甲醇溶液浸提后，滤纸过滤，再采用大孔吸附树脂处理，然后色谱分离，可制得纯度≥90%的花色苷单体，花色苷纯度较高。但是该专利所公开的方法并不适用于红肉桃花色素苷的分离提纯。因为花色素苷属于酚类物质的一种，而红肉桃果肉中除了含有大量的花色素苷以外，还同时含有大量的其它酚类物质，如绿原酸和原花青素的含量极其丰富，再加上酚类物质结构较相似，故分离提纯比较困难。文献《荔枝果皮中花色苷的分离纯化、结构鉴定及其抗氧化活性》公开了利用大孔树脂吸附后进行了葡聚糖凝胶的二次纯化分离花色苷的方法，花色素苷的纯度也仅为82.7%。因此，如果按现有技术对红肉桃花色素苷进行简单的一种性质的大孔树脂的一次吸附洗脱或者仅再结合葡聚糖凝胶的再次纯化，并不能得到纯度高的花色素苷单体。

发明内容

本发明的目的是提供一种从红肉桃中分离提纯花色素苷的方法，该方法能从红肉桃中分离获得高纯度的天然花色素苷。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种从红肉桃中分离提纯花色素苷的方法，其步骤包括：

（1）红肉桃果肉材料的制备：取红肉桃果实果肉，液氮研磨成粉，-70℃保存备用；

（2）红肉桃果肉花色素苷粗提液A的制备：取一定量的红肉桃果实粉末，用体积比乙醇:水:甲酸:三氟乙酸=70:27:2:1的混合溶液为浸提剂，浸提剂体积:粉末重量=2mL:1g，避光超声波提取，然后在4℃下10000 rpm离心10min，取上清液于30℃下真空浓缩至无乙醇，得到粗提液A；

（3）红肉桃果肉花色素苷一次纯化液B的制备：取粗提液A用已活化的大孔树脂Amberlite XAD-7吸附，待吸附结束，用三氟乙酸酸化的PH值调节到2-3的80%乙醇将树脂柱上吸附的花色素苷洗脱下来，于30℃下真空浓缩至无乙醇，制得一次纯化液B；

（4）红肉桃果肉花色素苷粗提液C的制备：取一次纯化液B用已处理平衡好的葡聚糖凝胶Sephadex LH-20吸附，待吸附结束，用三氟乙酸酸化的PH值调节到2-3的20%甲醇将树脂柱上吸附的花色素苷洗脱下来，于30℃下真空浓缩至无甲醇，制得二次纯化液C；

（5）红肉桃果肉花色素苷提取浓缩液的制备：取二次纯化液C用已活化的大孔树脂SP700吸附，待吸附结束，用三氟乙酸酸化的PH值调节到2-3的60%乙醇将树脂柱上吸附的花色素苷洗脱下来，收集洗脱液于30℃下真空浓缩至无乙醇，得到花色素苷提取浓缩液；

（3）利用高效液相色谱表征、分离提纯花色素苷单体：取一定量的花色素苷提取浓缩液，上反相C18色谱柱，分离条件为：

流动相A：甲醇：磷酸：三氟乙酸=97:2:1V/V；

流动相B：水：磷酸：三氟乙酸=97:2:1V/V；

流速：1.0 ml/min；

波长：515 nm；

柱温：25℃；

梯度冲洗：0~17 min，流动相B从95-44%；17~20 min，流动相B从44-95%；

用紫外检测器检测洗脱液，根据所得的色谱图收集含红肉桃果肉中主导花色素苷组分的洗脱液，将洗脱液于30℃下真空浓缩干燥得到花色素苷单体。

进一步的，所述花色素苷为矢车菊素 3-葡萄糖苷。

进一步的，所述红肉桃果实为成熟的‘北京一线红’品种果实。