[发明专利]一种提高依诺肝素纯度的方法

说明书

技术领域

本法说明涉及一种提取提纯制备原料药的方法，属于化学领域，具体是一种制备高纯度精品依诺肝素。

背景技术

依诺肝素是由猪或牛的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质，在动物体内多以依诺肝素-蛋白质复合物的形式存在。医学上，依诺肝素在体内外均有抗凝血作用，可延长凝血时间、凝血酶原时间和凝血酶时间。临床上具有抗凝血、降血脂、保护内皮细胞、抗血小板积聚和释放、促纤溶、抑制动脉平滑肌细胞增殖、降低血液粘度和抗炎等作用。

2008年2月11日，美国因注射依诺肝素出现4例死亡，350多例不良反应，成为轰动世界的“依诺肝素事件”。经过专家论证，上述死亡和不良反应是由于依诺肝素中含有多硫酸软骨素所致。多硫酸软骨素是类肝素的一种，其性质与依诺肝素基本相似，经过检测与依诺肝素的区别是:1、依诺肝素是右旋结构；而多硫酸软骨素是左旋结构；2、所含阴离子强度有差异。3、多硫酸软骨素经检测比依诺肝素的分子量大。

国际依诺肝素供应商对此相当重视 ，因此我公司一直致力于此项研究中，收获多多。

发明内容

本发明提供了一种萃取法分离依诺肝素中的多硫酸软骨素的方法，是为了攻克国内外专家关于依诺肝素中的多硫酸软骨素不能分离的定论，利用多硫酸软骨素的性质，用离子交换树脂交换和乙醇沉淀，从而实现用萃取法将依诺肝素与多硫酸软骨素彻底分离。

（1）    本发明的技术方案为：一种制备高纯度依诺肝素的工艺，其步骤如下：将粗品依诺肝素溶入饮用水中，搅拌5-10小时，将其全部溶解；

（2）    将步骤（1）中溶解液，用盐酸溶液调PH至7.0-8.0，然后升温至50-55℃之间时加入5-15g/亿单位胃蛋白酶，再加入5-25g/亿单位胰酶，保温2-4小时；

（3）    将步骤（2）中酶解液在30～40分钟内升温至85-90℃，静止10-30分钟，搅拌，然后等降温至50-55℃时，用1-3mol/L氢氧化钠溶液调PH至10.0-12.0，静止20-30小时，分层，过滤，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液；

（4）    待步骤（3）中上清液和离心液用弱碱性离子交换树脂吸附，用0.3-0.4g/L的氯化钠洗脱，连续洗脱两遍；

（5）    取步骤（4）中洗脱液，用2-6mol/L氢氧化钠溶液调PH至10.0-12.0，然后加入3-5%双氧水，氧化10-12小时；

（6）         将步骤（5）中溶液用70-75%乙醇沉淀，再加入20-30g/L氯化钠溶液，静止沉淀10-12小时，取沉淀物，用70-75%乙醇溶解，静置24-30小时，弃去上层液，将不锈钢砂芯棒放在产品中，用真空泵通抽干；

（7）         将步骤（6）中产品放在真空干燥箱中，烘干70-80小时，得产品。

有益效果：

（1）    本发明结合升温氧化结合多种物理提取方法并纯化得到效价高于180U/mg，收率高于80%的高纯度依诺肝素。（2）通过升温补加双氧水可以有效的控制依诺肝素氧化失活，并且实现了氧化与脱色同步进行。（3）依据依诺肝素及其结构类似物的极性差异，在氯化钠溶液中用离子交换树脂，再用乙醇沉淀洗脱，最后得到依诺肝素产品。工艺采用的方法，使得多硫酸软骨素杂质被萃取，而依诺肝素产品留在了低盐溶液中，用乙醇沉淀，极大地提高了收率，最终得到的依诺肝素产品达到中国药典标准，并且经测不含多硫酸软骨素成分。

具体实施方式

实施例1