[发明专利]一株广谱、高效拮抗植物病原真菌和卵菌的胶状溶杆菌OH17的分离鉴定

说明书

(一)技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及一株对植物病原真菌和卵菌具有拮抗活性的细菌菌株的分离鉴定。

(二)背景技术

由病原真菌引起的病害，约占植物病害的70～80％，是影响我国农业产量、质量和效益的主要障碍之一。生产上防治真菌病害一般多采用化学农药进行保护性防治，然而，化学农药残留带来的食品质量安全问题和生态安全问题已成为社会各界关注的焦点。

开发生态安全、环境友好型的生物农药是解决上述问题的有效途径之一。目前应用的生物农药主要是微生物农药和农用抗生素两类，前者主要以微生物的活体为有效成份，后者以微生物的次生代谢产物为有效成份。这两类生物农药的开发均取决于具有生防潜力的微生物资源的鉴定和挖掘。

溶杆菌(Lysobacterspp.)属于黄单胞科、溶杆菌属。截止2014年7月，国际上已鉴定的溶杆菌属细菌有32个种，其中产酶溶杆菌(Lysobacterenzymogenes)、产抗生素溶杆菌(Lysobacterantibioticus)、胶状溶杆菌(Lysobactergummosus)和变棕溶杆菌(Lysobacterbrunescens)四个种具有高效抗菌活性和植物病害生防潜力，是一类新型植物病害生防细菌。这类细菌对植物病原真菌、卵菌、革兰氏阴性细菌(G^-)、阳性细菌(G⁺)和线虫都有显著的拮抗作用，其作用机理为：(1)产生小分子抗菌次生代谢物质；(2)分泌产生大量胞外酶，包括几丁质酶、β-1，3-葡聚糖、蛋白酶和纤维素酶；(3)诱导植物产生抗病性；(4)较好的定殖能力。

综上所述，分离鉴定新型具有重要生防潜力的溶杆菌菌株，对于生防溶杆菌资源库构建，以及新型、高效和广谱生物农药(农用抗生素)开发具有重要意义。

(三)发明内容

本发明利用稀释涂布的方法，以酿酒酵母作为靶标菌，从作物根际土壤筛选到一株对真菌和卵菌具有拮抗活性的细菌菌株OH17，经形态学、16SrDNA等方法鉴定为胶状溶杆菌(Lysobactergummosus)。该菌株对测试的多种植物病原真菌和卵菌具有较强的拮抗活性。

本发明提供的细菌菌株OH17，已于2013年12月27日保藏在位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为CGMCCNo.8649，分类命名为胶状溶杆菌Lysobactergummosus。

(四)附图说明

图1OH17在不同培养基上的菌落形态

图2OH17的电镜观察图片

图3OH17对病原真菌和卵菌的拮抗效果图

图4OH17的16SrDNAPCR电泳图

图5OH17的系统发育树

(五)具体实施方式

以下通过具体实施对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。

1材料和方法

1.1试验菌株、培养基

试验菌株：酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、水稻稻瘟病菌(Magnaporthegrisea)、小麦赤霉病菌(Fusariumgraminearum)、油菜菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorum)、棉花黄萎病菌(Verticilliumdahliae)、水稻纹枯病菌(Rhizoctorziasolani)、梨黑斑病菌(Alternariaalternata)、梨炭疽病菌(Colletotrichumgloeosporioides)、梨轮纹病菌(Botryosphaeriaberengeriana)、番茄早疫病菌(Alternariasolani)、茄病镰孢菌(Fusariumsolani)、水稻恶苗病菌(Fusariummoniliforme)、辣椒疫霉病菌(Phytophthoracapsici)、瓜果腐霉病菌(Pythiumaphanidermatum)。

培养基：

NA培养基：牛肉浸膏3g，蛋白胨5g，Yeastextract1g，蔗糖10g，蒸馏水1L，pH7.2，固体培养基分装后另加琼脂1.5g/100mL。

10％TSA：胰蛋白胨大豆肉汤培养基(Tryptic-Soytone-Broth-Medium)3g，蒸馏水1L，分装后另加琼脂1.88g/100mL。

TSA：胰蛋白胨大豆肉汤培养基(Tryptic-Soytone-Broth-Medium)30g，蒸馏水1L，分装后另加琼脂1.88g/100mL。