[发明专利]基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒的层析试纸条

说明书

技术领域

本发明属于食品(医学)检测领域，具体地说涉及一种基于低噪声激发式荧光染料标记的A组轮状病毒免疫层析试纸条及其制备方法与应用。

背景技术

轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的主要病原体之一，其主要感染小肠上皮细胞，从而造成细胞损伤，引起腹泻。轮状病毒每年在夏秋冬季流行，感染途径为粪－口途径，临床表现为急性胃肠炎，呈渗透性腹泻病。它广泛存在于自然界中，食品中存在的轮状病毒对人类的安全具有危险，该菌在低温仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。目前，轮状病毒已经作为致病菌检测的一项重要指标，在公共卫生、食品卫生、畜牧兽医和出入境检验检疫中均有重要的意义，同时也对轮状病毒的快速及高精度的定量检测提出了更高的要求。为探求快速、准确、高灵敏度、易操作且能够定量的检测方法，世界各国学者进行了大量研究，从以传统方法为基础发展到以免疫学、分子生物学为基础的快速检测方法，并在实践中不断取得新进展。

免疫层析技术是一项有效结合了层析法卓越分离能力和免疫反应高度特异性的新型免疫检测技术，当前在疾病快速诊断、环境污染物分析及致病生物因子检定等领域得到广泛应用。其原理是将特异抗原或抗体固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素膜一端浸入样品后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当迁移至交联标记抗体的特定区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合形成抗原-标记抗体复合物，经标记物的显色、发光或电化学反应而使该区域显示一定的信号，从而实现特异性免疫诊断。常用的标记物包括生色型探针(包括胶体金、胶体碳、着色微球等)和荧光分子(如有机荧光染料、量子点、稀土元素配合物、上转磷光颗粒等)。

然而上述的标记物却存在灵敏度有限且无法实现精确定量检测等缺陷，进而限制了免疫层析技术的广泛应用。如现有技术中常见的利用酶标记催化生色底物的酶促反应而显色，可用于抗原或抗体的直接检测，将该方法应用于食品中轮状病毒的检测，通过单克隆抗体大大降低假阳性率，但是该方法的灵敏度较分子生物学方法低，且必须经过增菌筛选纯培养步骤，因此难以在短时间内得到检测结果。

对于现有的胶体金免疫层析技术，通过胶体金等纳米颗粒的聚集反应而显色，从而实现结果判定。虽然该种方法具有便捷、快速、准确和无污染等特点被广泛应用于医学检测和临床诊断，在病原体检测方面，其敏感性、特异性具有其他免疫学方法无可比拟的优势，且无需特殊仪器设备，对检测人员的专业要求低，有良好的基层应用开发前景。但这种方法中存在标记物的稳定性较差，颜色单一，灵敏度较低，受基质的背景干扰大等缺陷，且只能定性检测，不能做到精确定量检测，上述标记灵敏度有限且无法实现精确定量，限制了免疫层析技术的应用。

另外，现有免疫层析技术一直主要用于对蛋白类的检测，对于微生物的检测则所见甚少，同时更难以实现微生物的定量检测，对于快速检测致病菌而言，其应用受到极大的限制。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于现有技术中难于快速定量检测轮状病毒的问题，进而提供一种基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒免疫层析试纸条，并进一步公开了其应用。

为解决上述技术问题，本发明提供的一种基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒免疫层析试纸条，包括：

底板以及沿所述底板的长度方向上依次粘附在所述底板上的样品垫、结合垫、抗体承载膜和吸水垫，所述样品垫、结合垫、抗体承载膜和吸水垫之间，依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠；所述抗体承载膜粘附于所述底板的中间部位，其上设置有相间隔的检测线和质控线，所述检测线靠近所述结合垫，所述质控线靠近所述吸水垫；

所述结合垫上喷涂有低噪声激发式荧光染料标记的可与A组轮状病毒特异性结合的单克隆抗体；

所述检测线由可与所述轮状病毒特异性结合的多克隆抗体涂层形成；所述质控线由与所述轮状病毒以及所述可与轮状病毒特异性结合的多克隆抗体均无关的抗体涂层形成。

所述的基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒免疫层析试纸条，所述结合垫上喷涂的所述可与A组轮状病毒特异性结合的单克隆抗体为鼠抗A组轮状病毒衣壳蛋白单克隆抗体。

所述的基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒免疫层析试纸条，形成所述检测线的可与A组轮状病毒特异性结合的多克隆抗体为羊抗A组轮状病毒多克隆抗体。

所述的基于低噪声激发式荧光标记的A组轮状病毒免疫层析试纸条，形成所述质控线的抗体为羊抗鼠IgG多克隆抗体。