[发明专利]一种免疫调节肽及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于医药及生物工程领域，涉及一种免疫调节肽及其制备方法和应用。

背景技术

现代营养学研究发现：人类摄食蛋白质经消化道的酶作用后，大多是以小肽形式消化吸收，以游离氨基酸形式吸收的比例很小，进一步的试验又揭示了小肽的吸收比游离氨基酸的吸收更为迅速。肽营养作用的另一新认识是蛋白质在酶解过程中可以产生一些具有特殊生理调节功能的生物活性肽。这些生物活性肽在调节胃肠道运动、调节免疫系统、抗高血压、抗菌、抗血栓、抗病毒、抗癌、清除自由基和促进矿物元素吸收等方面发挥着重要作用。这些生物活性肽本身以非活性状态存在于蛋白质氨基酸序列之中，当用适当的蛋白酶进行体外水解或在胃肠道消化过程中以及食品加工过程中，它们的活性就被释放出来。尽管其它动物和植物蛋白质中也包含活性肽序列，但是乳蛋白是目前生物活性肽的主要来源，对其研究最为深入。

免疫活性肽具有能刺激多核淋巴细胞，促进淋巴细胞分化和成熟，转移免疫信息，增强机体免疫机能等一系列的生物学功能。大量试验表明乳蛋白中隐含有许多免疫调节肽序列，这些免疫调节肽对免疫系统具有重要的调节功能。我们借助超滤技术分离出母乳中小于10KDa的多肽成分，进一步借助串联质谱技术对其具体组成进行鉴定分析。结果发现这些多肽主要是从人β-酪蛋白(Homo sapiens beta casein，基因Bank号：NM_001891)中断裂下来的片段，天然存在于母乳中。现有技术中没有对这些片断及其功能进一步研究的报道，为此，我们筛选了一些多肽进行深入的研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种免疫调节肽。

本发明的另一个目的是提供上述免疫调节肽的制备方法。

本发明还有一个目的是提供上述免疫调节肽的应用。

本发明的目的是通过下列技术方案实现的：

一种免疫调节肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。命名为Casein111。

表达上述免疫调节肽的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

所述多肽的扩增引物，其中上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

所述免疫调节肽的制备方法，该方法包括下列步骤：

a.构建上述多肽的表达载体pSUMO；

b.pSUMO融合蛋白的诱导表达；

c.pSUMO融合蛋白的纯化、收集；

d.重组抗菌肽的纯化、收集。

所述的制备方法，该方法包括以下步骤：

a.构建上述多肽(SEQ ID NO：1)的表达载体pSUMO：

人工合成该多肽核酸序列，利用上述的上下游引物通过PCR技术扩增出含有BsaI、HindIII酶切位点的该多肽核酸片段进行胶回收，回收产物双酶切后载入pSUMO载体；

b.pSUMO融合蛋白的诱导表达：

1)测序正确的质粒转入大肠杆菌(BL21)，接种于含卡那霉素的LB培养液培养；

2)收集菌体，重悬后加入IPTG诱导pSUMO融合蛋白表达；

c.pSUMO融合蛋白的纯化：

诱导表达后的菌液沉淀用Ni-NTA Binding-Buffer重悬后，超声破碎，离心，取上清，上清液上样至Ni-NTA亲和层析柱，洗脱pSUMO融合蛋白，收集洗脱液，SDS-PAGE电泳分析；

d.重组抗菌肽的纯化、收集：

采用SUMO酶对pSUMO融合蛋白进行酶切，利用Ni-NTA-Sepharose CL-6B亲和层析柱去除SUMO标签或没有被切割的SUMO融合蛋白，洗脱重组抗菌肽，电泳分析，收集重组抗菌肽。

所述的免疫调节肽在制备促T淋巴细胞增殖的药物中的应用。

所述的免疫调节肽在制备奶制品添加剂中的应用。

本发明有益效果：

本发明提供的免疫调节肽具有很强的促T淋巴细胞增殖作用，能够用于制备促T淋巴细胞增殖的药物。该调节肽是母乳来源，母乳作为新生儿最重要的食物，具有很高的安全性。另外，新生儿免疫力和抵抗力都比较低下，该肽还可以用于制备奶制品添加剂。

本发明提供的多肽可以通过化学合成得到，但是合成的成本高，因此，本发明还提供了该多肽的基因重组技术制备方法，该制备方法简单易行，成本低，易于产业化应用。