[发明专利]一种发酵产脂肪酶的方法

说明书

本发明提供一种发酵产脂肪酶的方法，该方法在发酵过程中添加发酵液初始体积0.6‑1.2％的有机硅类消泡剂；或，在发酵过程中添加发酵液总体积0.4‑0.8％的有机硅类消泡剂。本发明的方法很好的提升了发酵产脂肪酶的产量，并提高了所获得的脂肪酶的活力及其固定化酶活力、固定化酶稳定性。

技术领域

本发明涉及一种生物发酵领域，具体的，涉及脂肪酶的发酵生产。

背景技术

脂肪酶TLL(疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶)主要用于油脂的水解、三甘油酯的改性以及单甘脂和二甘油酯的生产。目前国内外文献报道重组毕赤酵母表达人工合成的TLL质粒发酵方面的文献及专利几乎没有，主要都是集中在成品Lipozyme TL IM和Lipozyme TL100L应用方面的研究。如江南大学用Lipozyme TL 100L生物合成蔗糖-6-乙酸酯。华南理工大学用Lipozyme TL IM催化甲醇分解生成生物柴油等。

有关消泡剂对于提高重组毕赤酵母表达人工合成的TLL质粒酶活力及蛋白活力方面的文献及专利研究也没有发现。有报道消泡剂在L-氨基酸生产中对其产量有提高的作用。

消泡剂在发酵应用中可有效的抑制发酵液的溢流，减少物料的损失，并能有效的降低溢流导致的染菌风险。常规发酵中大多采用聚醚类消泡剂，且消泡剂的用量一般都是发酵液体积的0.1-0.5‰，使用量过多会使菌体代谢发生紊乱，产生中毒现象。

目前，发酵行业生产过程中加入的消泡剂主要是聚醚类消泡剂和有机硅类消泡剂，由于聚醚类消泡剂只含有C、N、O、H几种元素，且具有抑泡时间长，活力好，消泡速度快特点。为发酵行业中首选的消泡剂。而有机硅类消泡剂在高温下宜发生分层，应用消泡活力不稳定，由于有机硅类消泡剂中含有硅元素，在应用中加入到发酵液中，对发酵有影响，使发酵的转化率降低，同时很难从发酵液中分离出去。如谢举文，发酵行业消泡剂的应用报道的。

本发明中意外的发现，采用与传统技术相反的策略，即不仅不减少消泡剂的用量，反而大幅度提高消泡剂的用量，并使用有机硅类消泡剂，毕赤酵母发酵产脂肪酶中的目标酶的固定化的活力、产量、酶活稳定性都有显著提高。

发明内容

本发明的第一方面在于，提供一种发酵产脂肪酶的方法，所述方法在发酵过程中添加发酵液初始体积0.6％-1.2％的有机硅类消泡剂。

在本发明的一个实施方案中，在发酵过程中添加发酵液总体积0.4％-0.8％的有机硅类消泡剂。

在本发明的一个实施方案中，所述脂肪酶为疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶。

在本发明的一个实施方案中，所述方法为重组毕赤酵母发酵产疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶。

在本发明的一个实施方案中，所述有机硅类消泡剂为乳化硅油。

在本发明的一个实施方案中，所述发酵于25-35℃下进行。

在本发明的一个实施方案中，所述发酵时间为80-120h。

本发明的第二方面在于，提供一种提高发酵产脂肪酶产量方法，所述方法在发酵过程中添加发酵液初始体积0.6％-1.2％的有机硅类消泡剂。

在本发明的一个实施方案中，在发酵过程中添加发酵液总体积0.4％-0.8％的有机硅类消泡剂。

在本发明的一个实施方案中，所述脂肪酶为疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶。

在本发明的一个实施方案中，所述发酵为重组毕赤酵母发酵产疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶。

在本发明的一个实施方案中，所述有机硅类消泡剂为乳化硅油。

本发明的第三方面在于，提供一种脂肪酶固定化酶，所述固定化酶使用本发明方法获得的脂肪酶制备。