[发明专利]副猪嗜血杆菌血清分型PCR方法

权利要求书

1.副猪嗜血杆菌血清分型PCR方法，包括以下步骤，

1)引物设计：比对副猪嗜血杆菌的荚膜合成基因簇上的保守基因序列，为15种血清型分别对应设计一对引物，作为血清分型PCR引物；

2)PCR扩增：以副猪嗜血杆菌15种血清型的参考菌株的基因组DNA为模板，以无菌双蒸水或超纯水为阴性对照，分别用上述设计的15对PCR引物进行PCR扩增；

3)凝胶成像：PCR扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统观察每条引物扩增的目的条带，记录目的条带信息；

4)菌株检测：以待测菌株的基因组DNA为模版，以无菌双蒸水或超纯水为阴性对照，分别用上述15对PCR引物扩增，电泳凝胶成像，与参考菌株的目的条带信息进行比对，进行血清分型鉴别。

2.如权利要求1所述的副猪嗜血杆菌血清分型PCR方法，其特征在于，步骤1)所述15对PCR引物的序列为SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.30。

3.如权利要求1所述的副猪嗜血杆菌血清分型PCR方法，其特征在于，步骤2)所述PCR扩增的条件如下：

50μL反应体系：2×Taq PCR Master Mix 25μL，10mmol/mL引物各1μL，模板DNA 1μL，然后加入无菌双蒸水或超纯水补足至50μL；

PCR反应程序：95℃预变性5min；然后按94℃变性45s，59℃退火30s，72℃延伸30s，进行35个循环；然后72℃延伸10min。

4.如权利要求1所述的副猪嗜血杆菌血清分型PCR方法，其特征在于，步骤3)电泳成像条件如下：

用1％浓度的琼脂糖凝胶在120V电压下电泳15min，凝胶成像系统观察每条引物扩增的目的条带大小。