[发明专利]一种从大叶千斤拔中提取染料木苷的方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然产物的提取，具体涉及一种从大叶千斤拔中提取染料木苷的方法。

背景技术

染料木苷(Genistin)是一种异黄酮类化合物，在体内代谢具有雌激素样作用，被称为植物雌激素类药物。染料木苷在人体肠道菌群作用下水解成染料木素，通过竞争性地结合雌激素受体而发挥作用，在医药行业主要用于治疗妇科类疾病。

在现有技术中，专利文献CN1876671公开了一种从豆粕中提取的大豆异黄酮提取物及提取方法，所述提取物中含有染料木苷、大豆苷和大豆黄苷，该方法提供的产物为异黄酮苷的混合物，且没有涉及针对染料木苷的分离方法。目前，亟需开发一种适于规模化生产的提取高纯度染料木苷的方法。

发明内容

本发明公开了一种从大叶千斤拔中提取染料木苷的方法；该方法的原料丰富易得，工艺简单可行，污染少，周期短，所得产品纯度高，易于规模化制备。

本发明提供了一种从大叶千斤拔中提取染料木苷的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)将原料大叶千斤拔切碎，用浓度50～70％的乙醇水溶液回流提取1.5～5h，得提取液；

(2)将步骤(1)所得提取液浓缩后上色谱柱，所述色谱柱中的固定相为大孔吸附树脂；以体积比15～25:85～75的乙醇-水溶液为流动相进行洗脱，收集洗脱液；

(3)将步骤(2)所得洗脱液浓缩至稠状浸膏，加入含有2～3％冰醋酸的乙醇，充分溶解，静置，过滤除去不溶物，将滤液重结晶，用乙醇洗涤晶体，真空干燥，即得染料木苷。

本发明所述步骤(1)中：

所述乙醇水溶液的浓度为乙醇与水的体积比，该浓度优选为60％；

所述步骤(1)中将原料大叶千斤拔切碎优选为将大叶千斤拔切成2-3cm的片段；

所述提取可以提取一次，加入乙醇水溶液的体积为原料大叶千斤拔重量的7.5～8.5倍，优选为8倍，提取时间优选为1.5～5h，进一步优选为4h；也可以以相同浓度的乙醇水溶液提取多次后将提取液合并，优选为提取两次，其中，第一次在原料中加入占原料大叶千斤拔重量7.5～8.5倍体积的乙醇水溶液，优选为8倍体积，回流提取1.5～2.5小时，优选为2小时，过滤，得第一次提取液和滤渣；在滤渣中加入占原料大叶千斤拔重量5.5～6.5倍体积的乙醇水溶液，优选为6倍体积，回流提取1.5～2.5小时，优选为2小时，过滤，得第二次提取液；将两次提取所得提取液合并；该步骤所述大叶千斤拔重量的单位为kg，乙醇水溶液体积的单位为L。

本发明所述步骤(2)中：

步骤(1)所得提取液应被浓缩至与色谱柱规格相匹配的、适于上样的体积，且应确保所有溶质均处于充分溶解状态；样品浓缩后，采用常规方法上色谱柱，应使样品充分吸附到大孔吸附树脂上，且不浪费；

所述固定相使用的大孔吸附树脂型号优选为D101，所述固定相中粒度0.3-1.25mm的树脂颗粒不少于95％；大孔吸附树脂被填充于色谱柱中，在使用之前，应采用常规方法进行活化处理；

所述流动相中，乙醇-水的体积比通过大量实验进行筛选得到，在15～25:85～75的范围内可以将目标化合物染料木苷集中洗脱下来；所述乙醇-水的体积比优选为20:80；

所述流动相洗脱将目标化合物充分洗脱下来且不浪费流动相即可，洗脱体积优选为1.5～2倍于色谱柱体积；洗脱速度为以大孔吸附树脂为固定相进行洗脱的常规速度；

为了提高洗脱液中染料木苷的纯度，在样品充分吸附到大孔吸附树脂后、流动相洗脱前，可先用不含乙醇的水进行预洗脱，预洗脱所得产物不作为洗脱液收集；所述预洗脱的体积优选为1.5～2倍色谱柱体积。

本发明所述步骤(3)中：

所述溶解稠状浸膏的溶剂用量以将浸膏充分溶解且不浪费溶剂为宜，优选为3～5倍稠状浸膏体积，进一步优选为4倍体积；所述溶剂乙醇中冰醋酸的浓度优选为2.5％，所述浓度为冰醋酸与乙醇的体积比；

所述将滤液重结晶具体为：将滤液在55～65℃下减压浓缩至原体积的1/2～1/3，优选为在60℃下减压浓缩至原体积的1/2，自然冷却后，置于2～4℃下充分析出晶体，优选为4℃下充分析出晶体，过滤除去母液，即得晶体；

所述真空干燥的条件优选为：55～65℃下真空干燥3～5小时，进一步优选为60℃下真空干燥4小时。

作为优选方案，本发明所述方法包括以下步骤：