[发明专利]一种用于转基因禽制备的种蛋开窗封口方法

说明书

技术领域

本发明属于家禽转基因技术领域，具体涉及一种用于转基因禽制备的种蛋开窗封口方法。实质上属于家禽转基因技术领域的一种辅助方法。与禽蛋接种实验相关。

背景技术

随着分子生物学技术的发展及一系列模式生物基因组计划的相继完成，生命科学研究已取得了重大突破，中国在生命科学领域也做出了巨大的贡献。目前，多种动物的全基因组测序工作已完成，然而基因组序列测定的完成仅仅是基因组计划的第一步，更大的挑战在于如何确定基因的功能并阐述其调控的机理。禽类作为科学研究中的一种模式生物，其胚胎对于基因功能的研究有着无法取代的优点。随着新技术的发展及鸡、鸭等禽类基因组序列的完成，禽类胚胎在发育生物学、遗传学、免疫学等研究领域的重要性日益凸显，推动了禽类功能基因研究工作的开展。利用禽类胚胎模型进行基因功能的研究，首先要解决在胚胎中实现外源基因转移的问题。

种蛋开窗是实现外源基因转移的第一步工作，开窗采用的方法、开窗部位等均严重影响胚胎的存活率及后期的发育情况。种蛋开窗部位主要包括锐端开窗、钝端开窗和赤道面开窗，其中最常用的是赤道面开窗，因为在赤道面开窗，胚胎与眼睛的距离较近，操作方便，并能保持胚胎气室的完整性，利于种蛋的孵化和胚胎的发育。种蛋的开窗方法主要集中在机械开窗法中机械的选择，如马达磨轮、钻孔器、手术刀片、自制开蛋工具等。但总体来说，这些机械开窗法操作费时，有些还需要特殊的工具如钻孔器等，对胚胎的机械损伤大，且容易破坏蛋壳及壳膜，导致胚胎存活率不高。另外，开窗后封口时，常用蛋壳膜或石蜡封口，费时费力；用透明胶带或封口膜封口，密封不严，导致种蛋孵化过程中蛋清外溢现象的出现，严重降低存活率。总的来说，目前的方法存在一些缺陷，可利用率不高。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种用于转基因禽制备的种蛋开窗封口的方法，该方法适用于在鸡、鸭等禽类胚胎中进行基因功能的研究及转基因禽的制备，整个操作过程简单，无须专门的仪器设备，无须特殊的技术要求，可同时进行批量处理，后期胚胎存活率显著提高。

具体地，本发明通过以下技术方案实现：

一种用于转基因禽制备的种蛋开窗与封口的方法，包括开窗和胚胎操作，其特征在于：将种蛋消毒后水平放置2h，使胚盘浮于赤道面，在种蛋赤道面粘贴一块用于开口处的透明胶带；用眼科剪在粘贴了胶带的赤道面剪切开窗，从锐端向钝端剪切再回到锐端，保留开窗的蛋壳粘连在赤道面靠近锐端处，用眼科镊去除壳膜；通过窗口进行胚胎操作，再将粘连的蛋壳用一块用于封口处的透明胶带封口复原，将操作后的种蛋放回孵化箱孵化；

用于开口处的透明胶带长、宽均为3-4cm，粘贴位置在种蛋赤道面。

所述剪切开窗的窗口直径为1-1.2cm，以便于胚胎操作为宜。

所述剪切开窗的剪切方向为：从锐端向钝端再回到锐端，保留开窗的蛋壳粘连在赤道面靠近锐端处。

所述胚胎操作包括脂质体转染、电穿孔、病毒感染、卵黄囊血管注射、药物处理。

所述封口是将剪切开窗的蛋壳用透明封口胶带原位复原。用于封口处的透明胶带长、宽均为2-3cm。

本发明的方法适用于鸡、鸭、鹅或其它禽类的种蛋的开窗与封口，以方便转基因禽制备的种蛋开窗封口。

具体地，本发明的步骤如下所述：

一种用于转基因禽制备的种蛋开窗、封口方法，包括开窗和胚胎操作，本发明的要点在于：将种蛋消毒后水平放置2h，使胚盘浮于赤道面，在种蛋赤道面粘贴一块透明开口胶带；用眼科剪在粘贴了胶带的赤道面剪切开窗，从锐端向钝端剪切再回到锐端，保留开窗的蛋壳粘连在赤道面靠近锐端处，用眼科镊去除壳膜；通过窗口进行胚胎操作，再将粘连的蛋壳用一块透明封口胶带封口复原，将操作后的种蛋放回孵化箱孵化；

其中：用于开口处的透明胶带长、宽均为3-4cm，粘贴位置在种蛋赤道面。

其中：所述剪切开窗的窗口直径为1-1.2cm，以便于胚胎操作为宜。

所述剪切开窗的剪切方向为：从锐端向钝端再回到锐端，保留开窗的蛋壳粘连在赤道面靠近锐端处。

所述胚胎操作包括脂质体转染、电穿孔、病毒感染、卵黄囊血管注射和药物处理。

其中：所述封口是将剪切开窗的蛋壳原位复原。

其中：用于封口处的透明胶带长、宽均为2-3cm。

其中：所述种蛋为鸡、鸭、鹅或其它禽类的种蛋。