[发明专利]大白菜抗根肿病CRb基因的连锁分子标记、引物及抗根肿病植株的选择方法

权利要求书

1.与大白菜抗根肿病CRb基因紧密连锁的分子标记： TCR108，其特征在于，所述分子标记的核苷酸序列如下：

TCR108：

5'-TCTGTCATGTATTATTTAGAACAAAAATATTATTAATATTAATTAACAATATCTTTATATATTTGTCATTTATTTTTATATACTTTTATATACACATACATGTGCACCTTGATGTGAGTACTTTATAAGTATTTACCACTACTGAAATATCTATATTTTTTTTGAAGTTGAAATATTTTTTTCTTAATGCTTCTTTCACTACCGACCAAATTGTAGTGAAATGATTAGTCTTAATAATTTTCTTTTCTTTTTCTTGAACTATTATCCGTTTACAAACTATAATATGAAACCATTGGTTCGACATGACAATTATCTAAAATTTATAACATAAAAATTAACAAATAATAATAATTTTTGGTTTTTACCGAAAAACTAACAAATCAAACATTCTAACAGAAAAAAACCAAAAAATAATTTAAAACCGAACCAATATCTAGATTAAACAGATTTAATGTGTTTTTATTAAAAATAACGAAACTAATAATCACATGCCGCGCAAGGCGCGGATTATTACCTAGTAATTTTAGTAAAAAAAAACATGGCTGTTTTTTTACAGTCATATATATTTTTCTTTGACAATTGATTTGACGTACAGGTATCTGTTCAAAAAATGAGTATCTGACATGACAAAAATAAGATTCAGTTGCATTCGATCTTCTCTTTTTATAGTTGCATTTGATCATTATTTCTATAAAAATACATATGATGCCCAACATGTAGTATTACAAATCGTTATATTTAAATAAGGTAACAAAAATATTTTTTTTATTTAAAAAAACAAAAATATTTTGAAATGCTTTTTCGTTTAGGATTTTAAATAGCCAACTATTAAAATAAAATATAAACCACCGCAAAAGAAAAAAAAGTAACAGCTATCAGAAATTCAGAATATAAAAAACGTATAGGTTCACGGGTCTCCGATATGCCATGGTGGAGTTTCGTAACTACAACTGCATGAAGAGAGCTTTTGAGATGGTTTAAAATTTTAAATCAGTAAAACTGAAAATCGAGAATGTGAATATTTATTATCATTTTCCTTAAATTGTCTATTAAATATCATTAAATTTTAATTTTATTTATCACCAGAAAAGGAAAAGAATCTATAAGATACAGTTAAAAAAAAAGAATCTATAAGATACATATTAGTTGACTGAAAGGAGATTAAATTATAATTAATGTAGACAGAGTACAATGAATTAACATGTTTGATTGGAAAACAGTTTTATATAGTAGTACATTCTTATATATTTAATTTTAAGATTAGAAGTAACACAGAATAAGATACTGATATTATAAAGATGCTTTGACTAGTCAAGGTACACTGTTCCATACGTTTGTGTGCCAAGGAAACATGCATGAGTGCATC-3’。

2.根据权利要求1所述的与大白菜抗根肿病CRb基因紧密连锁的分子标记： TCR108的PCR特异性扩增引物，其特征在于，如下序列：

TCR108

F TCR108: 5’- TCTGTCATGTATTATTTAGA-3’

R TCR108: 5’- GATGCACTCATGCATGTTTC-3’。

3.如权利要求1所述的与大白菜抗根肿病CRb基因紧密连锁的分子标记TCR108在辅助选择大白菜抗根肿病植株中的应用，其特征在于所述辅助选择方法是：

（1）用CTAB方法对待测材料进行基因组DNA的提取；

（2）PCR扩增：

a. 反应体系：10 µL体系，各组分物质的含量分别为15 ng 模板DNA; 5 pmol·L^-1primer; 1.0 mmol·L^-1 dNTP; 1.0µL 10×PCR Buffer; 0.5 U Taq DNA polymerase; ddH₂O补齐10 µL，混匀，离心；

b. 扩增程序：预变性94℃/5min; 94℃/30s; 60℃/45s; 72℃/30s; 35个循环后; 72℃延伸10min; 最后4 ℃保存；

c. 电泳

将扩增产物与等体积的上样缓冲液混合，之后在琼脂糖凝胶电泳仪上进行1%琼脂糖凝胶电泳，100V条件下电泳30分钟；电泳结束后，在紫外灯下观察、成像；

d. 判断

权利要求2所述的扩增引物的扩增结果中如果能够检到1366bp条带，则带有1366bp条带的材料含有大白菜抗根肿病基因CRb的概率约为99.96%。