[发明专利]一株具有抑菌活性的枯草芽孢杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株具有抑菌活性的枯草芽孢杆菌及其应用。

背景技术

抗生素是某些微生物通过酶促反应将初级代谢产物转变为结构性的次级代谢产物。抗生素不合理的大量使用、滥用，加上缺乏严格的监管，导致死亡、耐药微生物及超级耐药菌株的产生，抗生素的误用也置病人于不必要的抗药性风险中；由不良药物反应导所致的住院治疗费用已增长至亿万美元，大大增加了医疗成本，滥用抗生素产生的副作用已成为全球性亟待解决的问题。

外阴阴道假丝酵母菌(Vulvovaginal candidiasis，VVC)及细菌性阴道病(Bacterial Vaginosis，BV)是阴道微生态失衡所致的一种感染，即由白色念珠菌(Candida albicans)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)等大量繁殖所致，常常表现为分泌物增多、有异味，外阴瘙痒、白带异常，颜色发黄或灰白、质稀薄或呈豆渣样、有腥臭味，或有烧灼感、下腹疼痛或腰疼、腰酸等，严重影响广大女性的工作和生活。据调查：75％的育龄妇女一生中至少有一次发病，全球数以万计的妇女一直被这种阴道病困扰着。

目前治疗阴道感染的措施主要是运用抗生素、灭滴灵、雌激素以及酸化阴道的制剂等来杀灭阴道内的病原微生物。抗生素在杀死病源微生物的同时也杀死正常菌群，引起致病菌或条件致病菌的过度繁殖，造成反复感染、多重感染，产生耐药性、抗药性，增加治疗的难度和成本。中药治疗，采用熏洗的方法，往往对BV效果不佳，目前市面上常见的中成药物凝胶剂、栓剂、泡腾片等，主要是用于抗菌药物的辅助治疗。据调查很多药物效果不佳，特别是对VVC、复发性念珠阴道病(recurrent vulvovaginal candidiasis，RVVC)，疗程长易反复。

因此，开发无毒副作用、安全高效的具有抗感染性能的益生菌菌株，可以减少、替代甚至取代抗生素的使用，有效降低抗生素带来的一系列的副作用。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是自然界中广泛存在的一种非致病性细菌，能产生多种抗真菌和细菌的代谢物，不会产生耐药性，将其作为抗生素的替代品，其研究和开发意义重大，市场前景广阔。

发明内容

本发明的目的是提供一株具有抑菌活性的枯草芽孢杆菌及其应用。

本发明提供的具有抑菌活性枯草芽孢杆菌，该菌株命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus  subtilis)JYM841，已于2014年1月10日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 2014012。

所述菌株的主要生物学特征为：该菌种的细胞大小为通常为(0.7μm～0.8μm)×(2.0μm～3.0μm)，杆状，很少成链，染色均匀，无荚膜，鞭毛侧生，能运动；芽孢呈椭圆形或柱状，中生或偏生，大小为0.8μm×(1.5μm～1.8μm)；游离孢子表面着色弱；培养基上的菌落圆或者不规则形，表面色暗，变厚和不透明，可起皱，可呈奶油色或微粉色；革兰氏阳性，接触酶阳性，能发生V-P反应；能利用葡萄糖、阿拉伯糖、木糖和甘露醇产酸，能水解淀粉，分解色氨酸形成吲哚；生长温度最高值45℃～55℃，最低值5℃～20℃，最适温度为37℃。

本发明还提供一种菌剂，它的活性成分为枯草芽孢杆菌JYM841，CCTCC NO:M 2014012。

生产所述菌剂的工艺为：斜面接种-摇瓶接种-种子罐-发酵罐-产品，产品的包装剂型为液体菌剂或粉剂。

用所述菌株制备所述菌剂具体可采用如下步骤：

(1)菌种：选用枯草芽孢杆菌JYM841；

(2)斜面培养：将冻干粉菌种接种于固体斜面培养基上，在35℃～40℃培养24h～26h；

(3)一级种子培养：取培养好的斜面，在无菌条件下接种，用接种环取一到两环于50mL～100mL种子液体培养基中，在35℃～40℃，180rpm下震荡培养24h～30h，制得一级种子液；

(4)扩大培养：以0.5～1％的接种量(按体积百分数)，将一级种子液接于500mL～1000mL种子液体培养基中，在35℃～40℃，180rpm下震荡培养24h～26h，制得二级种子液；

(5)发酵罐培养：以0.5～1％的接种量(按体积百分数)，将二级种子液接于液体发酵培养基中，于25℃～28℃，罐压0.05MPa，通气量600m³/h条件下培养18h～22h；