[发明专利]一种黄曲霉毒素M1的化学发光试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测黄曲霉毒素M1的化学发光免疫检测试剂盒，用于检测牛奶、奶粉中的黄曲霉毒素M1含量或残留量。属于免疫学检测领域。

背景技术

黄曲霉毒素M1属于黄曲霉毒素一类结构相似的化合物中的一种，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。物理化学性质相当稳定，不被巴氏消毒法破坏。哺乳类动物摄入被黄曲霉毒素B1污染的饲料或食品后，通过羟基化作用转化成黄曲霉毒素M1。黄曲霉毒素M1危害主要表现在致癌性和致突变性，对人及动物肝脏组织有破坏作用，可导致肝癌甚至死亡。因此，大多数政府机构都对人体和动物可摄入的黄曲霉毒素量有严格的法规限制，很多国家已经对牛奶和乳制品中的黄曲霉毒素M1含量有了明确的限量标准，黄曲霉毒素1993年被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物。

目前，测定黄曲霉毒素M1的主要方法是荧光光度法、高效液相色谱、双流向酶联免疫法等。仪器方法是非常有效、准确、敏感的方法，但是待检样品需经一系列的预处理，繁琐费时，从样品预处理到得出检验结果需要较长时间，检测费用很高；另一方面这种检测方法还必须有昂贵的仪器设备，只有特定的专业人员才能应用，而且每次检测的样品有限，不适应大批样品的筛查，严重阻碍了该检测方法的推广应用，更不适合于现场检验。与之相比，化学发光免疫法具有快速、灵敏、方便、检测成本较低等特点，能最大限度地减少操作误差和工作强度，是一种非常适合基层检测牛奶、奶粉中黄曲霉毒素M1的筛选方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种黄曲霉毒素M1的化学发光检测试剂盒。该试剂盒具有检测灵敏度高、应用灵活、方便的特点，可用于牛奶、奶粉等样品中黄曲霉毒素M1的残留量检测。

为实现上述目的，本发明主要是利用抗原与抗体的特异性免疫反应的基本原理来实现的。化学发光免疫分析法是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光法的高灵敏性和免疫分析法的高特异性。在整个反应过程中，样品中黄曲霉毒素M1含量越高，反应体系中发光强度越弱；反之，样品中黄曲霉毒素M1含量越少，发光强度越高。

本发明的检测黄曲霉毒素M1的化学发光免疫检测试剂盒含有盒体，设在盒体内的化学发光板和设在盒体内的试剂。具体含有以下成分：

包被有抗黄曲霉毒素M1抗体的白色不透明96孔可拆卸或不可拆卸的聚苯乙烯化学发光板。

应用pH＝7.40.05mol/L的PBS溶液稀释黄曲霉毒素M1纯品得到的黄曲霉毒素M1系列标准品溶液，浓度范围至少包含了0.05～4.05ng/mL的浓度区间。

酶标抗原浓缩液：由黄曲霉毒素M1与卵清蛋白偶合制成的人工抗原与辣根过氧化物酶偶联制备得到。

酶标抗原稀释液：pH7.6的0.01M的磷酸钠、0.25M的NaCl溶液。

发光底物液：发光底物液分为A、B液。A液为化学发光底物-鲁米诺和发光增强剂-对甲苯酚溶液，B液为过氧化氢脲溶液。

浓缩复溶液：浓缩复溶液具体为2倍浓缩磷酸盐缓冲液，使用前用双蒸水稀释至工作浓度后使用，用于样品前处理。

浓缩洗涤液：浓缩洗涤溶液具体为含有吐温-20(Tween-20)缓冲液的20倍浓缩磷酸盐缓冲液，使用前用双蒸水稀释至工作浓度后使用，用于实验过程中洗涤化学发光板。

本发明溶液的配制：

本发明试剂盒中涉及的黄曲霉毒素M1标准品溶液、酶标黄曲霉毒素M1抗原溶液、化学发光溶液及洗涤溶液及其配方对本发明试剂盒检测的灵敏度影响很大；其中各溶液的主要成分及其配制方法是：

1、黄曲霉毒素M1标准溶液：以常规方法将黄曲霉毒素M1纯品用0.05mol/L，pH＝7.4的PBS配制成浓度分别为0、0.05、0.15、0.45、1.35、4.05ng/mL的黄曲霉毒素M1标准溶液。

2、酶标黄曲霉毒素M1抗原溶液：用黄曲霉毒素M1与偶联蛋白偶联制备的人工抗原与辣根过氧化物酶偶联制备得到，将所得酶标黄曲霉毒素M1抗原用酶标黄曲霉毒素M1稀释液稀释成1:4000的工作浓度。

3、酶标抗原稀释液：为pH7.6的磷酸钠为0.01M、NaCl为0.25M的缓冲溶液。

4、化学发光溶液：A液为鲁米诺含量为0.01M、对甲苯酚含量为0.001M pH＝8.8的三(羟甲基)氨基甲烷溶液，B液为每100mL溶液含柠檬酸2.1g，无水Na₂HPO₄2.82g，0.75％的过氧化氢脲0.64mL的水溶液。