[发明专利]一种高纯度皂苷产品的纯化工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种纯度大于70％的毛地黄皂苷的纯化工艺。

背景技术

毛地黄皂苷(如式1)是从紫花毛地黄的叶和种子中得到的一种配糖体，甾体皂角苷的一种。水解时，可生成作为糖苷配基(aglycone)部分的一分子毛地黄皂苷配基(digitogenin)，而作为糖的部分有两分子的D-葡萄糖和两分子一半乳糖以及一分子的木糖。这些糖部分是结合到毛地黄皂苷配基的第三碳原子的羟基上。因为，它能和具有游离3β-OH的甾体类(例如胆甾醇)以等分子的比例形成难溶于水的分子化合物的毛地黄皂苷化合物(digitonide)，这种特性可以被用来进行甾醇的定性和分离。作为重要的天然蛋白增溶剂、胆固醇测定剂具有较大经济价值和社会价值。目前已有的提取、纯化工艺可重复性差，溶剂毒性大，且只能得到最高为50％的液相纯度的毛地黄皂苷。

式1毛地黄皂苷结构。

发明内容

本发明目的在于提供一种能够用于胆固醇测定、蛋白增溶效果好的高纯度毛地黄皂苷的提纯工艺。该工艺简单易行，适于批量制备和工业化生产。所得到的毛地黄皂苷液相色谱纯度达到70％以上。

本发明提供了以下提纯工艺方案：

1、将毛地黄种子粉碎后，和乙醚溶剂置于渗滤筒内，浸泡后渗滤脱脂，脱脂后细粉装入提取罐，用30％的甲醇水溶液热提取3遍后，浓缩提取液至无醇味；

2、将得到的浓缩液上样到D201树脂柱上，依次用2倍柱体积量的蒸馏、3倍柱体积量的25％甲醇、4倍柱体积量的60％甲醇洗脱，收集60％醇洗脱液，减压蒸馏除去溶剂，得洗脱物；

3、将洗脱物用少量醇类溶剂溶解，选择正相硅胶，样品倒入硅胶层析柱上端，填料径高比为1∶8～12，醇洗脱物与硅胶的重量比为1∶40～60，以不同浓度的氯仿-乙醇-水梯度洗脱，用薄层层析法检测指导洗脱。薄层层析的条件为：正丁醇-36％醋酸-水(7∶1∶1至7∶3∶1)，显色剂为甲醇∶冰醋酸∶浓硫酸∶茴香醛＝170∶20∶10∶1(v/v/v)，甾体皂苷在层析板呈绿色。收集含有甾体配糖体的洗脱液，合并，浓缩，得到米白色粉末状的富集物。

上述方案中用于柱层析分离的填充剂为无定型硅胶、球形硅胶。硅胶的尺寸为100～200目或200～300目。

4、将上步的富集物溶于少量乙醇中，倒入反相键合硅胶填料的柱上端，层析柱高径比为1∶10～15，提取物与硅胶的重量比为1∶30～40，以不同浓度的甲醇水溶液梯度洗脱，同时用薄层层析法检测指导洗脱。收集含有甾体配糖体的洗脱液，合并，浓缩，回收溶剂，真空干燥箱干燥，得到高纯度的毛地黄皂苷。

上述方案中用于柱层析分离的填充剂为八烷基硅烷键合硅胶或十八烷基硅烷键合硅胶。洗脱用的甲醇-水比例为(1∶2～4∶1)。

5、用高压液相色谱(HPLC)对分离物进行定量分析，最终产品纯度大于70％。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明做进一步说明，实施例是用于说明本发明而不是用于限制本发明的范围。

实施例1

将3kg毛地黄种子粉碎后，和乙醚溶剂置于渗滤筒内，浸泡后渗滤脱脂，脱脂后细粉装入提取罐，用30％的甲醇水溶液热提取3遍后，浓缩提取液至无醇味；将得到的浓缩液上样到D201树脂柱上，依次用2倍柱体积量的蒸馏水、3倍柱体积量的25％甲醇、4倍柱体积量的60％甲醇洗脱，收集60％醇洗脱液，减压蒸馏除去溶剂，得洗脱物40g；

将40g洗脱物用少量乙醇溶解，选择正相硅胶(100～200目)，样品倒入硅胶层析柱上端，醇洗脱物与 硅胶的重量比为1∶40，依次用氯仿-乙醇-水(7∶1∶0.5)洗脱2倍柱体积洗脱，氯仿-乙醇-水(7∶2∶0.5)洗脱6倍柱体积洗脱，氯仿-乙醇-水(7∶2.5∶0.5)洗脱2倍柱体积洗脱，收集氯仿-乙醇-水(7∶2.5∶0.5)洗脱液浓缩，得到10g米白色粉末状的富集物。

将上步的富集物溶于少量乙醇中，倒入反相八烷基硅烷键合硅胶填料的柱上端，提取物与硅胶的重量比为1∶30，以4倍柱体积10％甲醇水溶液洗脱，6倍柱体积25％甲醇水溶液洗脱，收集后3倍柱体积25％甲醇水溶液的洗脱液，合并，浓缩，回收溶剂，真空干燥箱干燥，得到73％纯度的毛地黄皂苷2g。

实施例2