[发明专利]一种简便有效的悬浮细胞扩培操作方法

说明书

本发明提供了一种悬浮细胞扩培操作方法，其步骤如下：1)复苏一支293F细胞，加入到37℃水浴预热的培养基中，放入CO₂培养箱培养；2)进行第一次扩培：取20ml细胞悬浮液，向细胞悬浮液中倒入80g培养基，旋紧培养瓶盖，放入CO₂体积浓度为8％、37℃、转速140rpm的二氧化碳培养箱中培养；3)进行第二次扩培：将新的2L培养瓶旋开瓶盖后放入天平上清零，倒入400g的培养基，再清零天平，继续倒入100g悬浮细胞液，旋紧培养瓶盖，细胞放入CO₂体积浓度为8％、37℃、转速140rpm的二氧化碳培养箱中培养；4)进行第三次扩培。本发明的方法简便有效。

技术领域

本发明属于细胞工程领域，具体涉及一种悬浮细胞扩培操作方法。

背景技术

悬浮培养是游离的单细胞或细胞团按照一定的细胞密度悬浮在液体培养基中进行培养的方法。为使细胞不断增殖，培养一定时间必须进行扩培。扩培的方法是取培养瓶中一小部分悬浮细胞，按一定的稀释比例转移到成分相同的新鲜培养基中，需要较准确的控制悬浮细胞和培养基的量。整个悬浮细胞扩培操作必须满足无菌操作要求。在实验室摇瓶研究阶段，细胞扩培操作中悬浮细胞和培养基的无菌转移一般采用移液器和已灭菌的量筒(或其他已灭菌的带刻度的容器)。当移液体积较小(如200mL以下)时，一般采用移液器进行液体无菌转移。由于移液管的体积限制，当移液体积较大时，用移液器操作会显得特别繁琐，需要移液多次才能完成一个细胞扩培过程，操作效率低，在多次移液之后，容易忘记移液次数，导致移液体积不准。因此，当移液体积较大(如200mL以上)时，一般用已灭菌的量筒(或其他已灭菌的带刻度的容器)进行液体无菌转移。当移液体积较大，用已灭菌的量筒(或其他已灭菌的带刻度的容器)进行液体无菌转移时，需要提前对量筒(或其他可灭菌的带刻度的容器)进行灭菌，增加实验量和实验成本。在操作过程中，需要在悬浮细胞、培养液、无菌量筒(或其他已灭菌的带刻度的容器)和培养瓶之间进行液体的反复转移，增加染菌风险。无菌操作是细胞培养最基本也是最重要的要求，超净工作台或生物安全柜虽可控制空气洁净度到百级，但并不是无菌环境。减少液体反复转移的次数可显著缩短无菌液体与带菌空气的接触时间，减少染菌几率。

发明内容

本发明的目的是针对以上要解决的技术问题，提供一种简便、有效、安全的悬浮细胞扩培操作方法。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种简便有效的悬浮细胞扩培操作方法，其步骤如下：

1)复苏一支293F细胞，加入到37℃水浴预热的培养基中，放入CO₂培养箱培养；

2)进行第一次扩培：取20ml细胞悬浮液，向细胞悬浮液中倒入80g培养基，旋紧培养瓶盖，放入CO₂体积浓度为8％、37℃、转速140rpm的二氧化碳培养箱中培养；

3)进行第二次扩培：将新的2L培养瓶旋开瓶盖后放入天平上清零，倒入400g的培养基，再清零天平，继续倒入100g悬浮细胞液，旋紧培养瓶盖，细胞放入CO₂体积浓度为8％、37℃、转速140rpm的二氧化碳培养箱中培养；

4)进行第三次扩培：将新的3L培养瓶旋开瓶盖后放入天平上清零，倒入2000g的培养基，再清零天平，继续倒入500g悬浮细胞液，旋紧培养瓶盖混匀，再将一个新的3L培养瓶旋开瓶盖后放入天平上清零，将混匀的细胞倒入1250g到新的3L培养瓶，旋紧瓶盖，两瓶细胞一起放入CO₂体积浓度为8％、37℃、转速140rpm的二氧化碳培养箱中培养。

根据本发明的方法，优选地，所述步骤1)中，CO₂培养箱的培养条件为：CO₂体积浓度为8％、37℃、摇床转速140rpm。

根据本发明的方法，优选地，所述步骤1)中，细胞培养3天。