[发明专利]一种埃博拉病毒一步法核酸定量RT-PCR检测试剂盒

权利要求书

1.一种埃博拉病毒一步法核酸定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：本发明通过考察已知EBV基因组全序列，并根据检索所得EBV不同基因亚型一致性保守序列设计出一对EBV通用定量引物、一条EBV特异性荧光探针，及一对内参特异性引物和一条内参探针，采用实时荧光定量PCR方法扩增目的基因。

2.权利要求1所述的埃博拉病毒一步法核酸定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：EBV基因特异性定量序列和内参基因序列分别为：

〈SEQIDNo.1〉

5’-CCATTGCAAAATTAGAGGATGTAGATGTGTCTGATTATCCTGACCCGAGTGATATTCTTAAGATATACAATGCTGGAGACTATGTAATATCTATTCTTGGCTCAGAGGGTTATAAGATAATAAAGTACCTTGAACCA-3’，

〈SEQIDNo.2〉

5’-CATTGCTTCCATTGATGGCTTAAAGGACACCACCAATTGGTTCCTCTCTGTGCACAGGCTAATTTTTTAGGGAAAATCTGGCCTTCCCACAAGGGGAGGCCAGGGAATTTTCTTCACGTGCGCTGCYGAAGATCAAA-3’，

EBV一步法核酸定量RT-PCR检测试剂盒中核酸定量扩增基因序列全长137bp，属EBV基因组中VP30结构基因区，为单拷贝序列；内参基因序列全长137bp，与EBV核酸扩增基因序列有所不同。

3.如权利要求1所述的埃博拉病毒一步法核酸定量RT-PCR检测试剂盒，一对EBV核酸通用定量引物序列中的一条序列与SEQIDNo.1中所示的序列相同，另一条引物序列与SEQIDNo.1中所示的序列互补；EBV核酸定量特异性探针与SEQIDNo.1中所示的序列相同；内参特异性引物序列中的一条序列与SEQIDNo.2中所示的序列相同，另一条引物序列与SEQIDNo.1中所示的序列互补；内参特异性探针与SEQIDNo.2中所示的序列相同。其中，所述的一对EBV核酸通用定量引物，其序列可以选自SEQIDNo.3和SEQIDNo.4，

〈SEQIDNo.3〉为：5’-CCATTGCAAAATTAGAGGATGT-3’，

〈SEQIDNo.4〉为：5’-TGGTTCAAGGTACTTTATTAT-3’；

一对EBV核酸通用定量引物序列也可以是上述序列向前或向后延伸10～20个核苷酸的序列，或者和上述序列同源性大于85％以上；所述的EBV核酸定量特异性探针，可以选自SEQIDNo.5的序列，

〈SEQIDNo.5〉为：5’-FAM-CTGATTATCCTGACCCGAGTGATATT-BHQ-3’，

其中，探针5’-端标记FAM荧光基团，探针3’-端均标记淬灭基团。EBV核酸定量特异性探针序列也可以是上述序列向前或向后延伸10～20个核苷酸的序列，或者和上述序列同源性大于85％以上；所述的一对内参特异性引物，其序列可以选自SEQIDNo.6和SEQIDNo.7，

〈SEQIDNo.6〉为：5’-CATTGCTTCCATTGATGGCTTA-3’，

〈SEQIDNo.7〉为：5’-TTTGATCTTCRGCAGCGCACG-3’；

一对内参特异性引物序列也可以是上述序列向前或向后延伸10～20个核苷酸的序列，或者和上述序列同源性大于85％以上；所述的内参特异性探针，可以选自SEQIDNo.8的序列，

〈SEQIDNo.8〉为：5’-JOE-CCACCAATTGGTTCCTCTCTGTGCAC-BHQ-3’，

其中探针5’-端标记JOE荧光基团，探针3’-端均标记淬灭基团。内参基因序列也可以是上述序列向前或向后延伸10～20个核苷酸的序列，或者和上述序列同源性大于85％以上。