[发明专利]三阴乳腺癌标志物COL4A2及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和肿瘤药物领域，具体涉及一种三阴乳腺癌标志物COL4A2及其在三阴乳腺癌诊断中的应用。

背景技术

乳腺癌是女性中最常见且致死率最高的恶性肿瘤。全球每年有将近130万女性患上乳腺癌，并且有超过40万女性因为乳腺癌的转移复发而死亡。不同类型的乳腺癌可具有显著不同的生物学特性与临床表现。因此，对患者的乳腺癌进行分类已成为用于确定治疗方案的重要组成部分。目前临床上主要应用免疫组织化学方法，根据雌激素受体(estrogen receptor，ER)、孕激素受体(progesterone receptor，PR)和HER-2的检测结果，将乳腺癌分为4种分子亚型：luminal A型(ER阳性或PR阳性，HER-2阴性，Ki67低表达)、luminal B型(ER阳性或PR阳性，HER-2也阳性)、HER-2过表达型(ER、PR阴性，HER-2阳性，Ki67多为高表达)和basal-like型(ER、PR、HER-2均阴性)。

乳腺癌中恶性程度最高的一种亚型，称为三阴性乳腺癌，以雌激素受体(ER)阴性/黄体激素受体(PR)阴性/表皮生长因子受体(HER2)阴性为特征，三阴乳腺癌中有80-90％属于basal-like型。其发病率约占乳腺癌中的17％～25％，由于缺乏抗雌激素和抗HER2靶向治疗的靶标，以及极高的概率发生转移复发，是预后最差的一种乳腺癌类型。所以对三阴性乳腺癌需要尽早发现尽早治疗，越早发现治愈率将大大提高。然而，目前对三阴乳腺癌标志物的研究很少，本发明的目的在于发现新的三阴乳腺癌标志物。

发明人通过对不同细胞系进行比较研究，在三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231中发现一个特异表达的基因COL4A2，发明人进一步设计合成干扰COL4A2基因表达的序列并将其分别构建到质粒载体上，转染细胞MDA-MB-231，成功获得高效干扰COL4A2基因表达的序列。本发明提供的三阴乳腺癌标志物基因及高效干扰标志物基因的siRNA具有重要的临床应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种三阴乳腺癌标志物COL4A2基因，所述标志物基因在三阴乳腺癌细胞系高表达。

发明从MDA-MB-231、MCF-7、BT-474、SK-BR-3这4个细胞系中检测COL4A2基因的表达情况，发现COL4A2基因的mRNA在三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231中高表达，而其他三个乳腺癌细胞系相对表达较少。进一步的Western blot检测结果也显示COL4A2蛋白在MDA-MB-231细胞系中的表达明显高于其他3个细胞系。

本发明的目的是提供高效干扰三阴乳腺癌细胞中COL4A2表达的siRNA。所述siRNA序列见SEQ ID NO 1-SEQ ID NO 6。优选siRNA序列为SEQ ID NO 5或SEQ ID NO 6。

本发明的目的还包括提供一种高效干扰三阴乳腺癌细胞中COL4A2表达的干扰质粒载体，所述质粒载体包括上述siRNA。优选将siRNA构建到质粒载体pGenesil-1上形成干扰质粒载体。更优选的，siRNA序列为SEQ ID NO 5或SEQ ID NO 6。

本发明的目的还在于提供一种药物组合物，所述药物组合物包含上述的siRNA分子，或者包含上述干扰质粒载体。优选的，所述药物组合物包含序列为SEQ ID NO 5的siRNA分子或者包含序列为SEQ ID NO 6的干扰质粒载体。

发明人根据GenBank数据库中COL4A2(Gene ID：1284)基因序列设计了6条干扰序列及1条阴性对照序列，并将其分别以酶切连接的方式构建到质粒载体pGenesil-1上，将构建好的质粒载体分别转染细胞系MDA-MB-231，结果显示有3条质粒载体干扰效率都在60％以上，最高达69.61％，可以有效沉默COL4A2基因mRNA的表达。

本发明的目的是提供一种三阴乳腺癌检测试剂盒，所述试剂盒包括特异性引物、内参引物、标准DNA模板、荧光定量PCR反应液。所述特异性引物包括上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQ ID NO 14，下游引物序列为SEQ ID NO 15。

进一步，本发明的目的在于提供上述检测试剂盒在制备三阴乳腺癌辅助诊断或者预后制剂中的应用。

本发明的目的还在于提供三阴乳腺癌标志物COL4A2基因在制备检测三阴乳腺癌试剂或治疗抗三阴乳腺癌药物中的应用。