[发明专利]一种检测干酪乳杆菌菌株的方法及其试剂盒和引物对

权利要求书

1.一种特异性扩增干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)的引物对，其特征在于，其核苷酸序列分别如序列表中SEQ ID NO.1所示和如序列表中SEQ ID NO.2所示。

2.一种用于特异性扩增干酪乳杆菌的试剂盒，其特征在于，其包括核苷酸序列分别如序列表中SEQ ID NO.1所示和如序列表中SEQ ID NO.2所示的引物对。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括dNTP、PCR缓冲液、Mg²⁺、Taq DNA聚合酶和ddH₂O中的一种或多种；较佳地，还包括基因组DNA抽提试剂。

4.一种检测干酪乳杆菌菌株的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

(1)提取待检样品的基因组DNA作为模板，核苷酸序列分别为如序列表中SEQ ID NO.1所示和如序列表中SEQ ID NO.2所示的引物对作为引物，进行PCR扩增；

(2)检测步骤(1)PCR扩增产物中是否在461bp位置存在单一扩增产物。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述基因组DNA的提取方法为CTAB法。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述PCR扩增的反应体系为1×PCR反应缓冲液，10-15mmol/L Mg²⁺，0.2-0.3mmol/L dNTP，0.1-0.3μM所述引物，Taq酶0.01-0.1U/μL，所述模板10-100ng/μL；和/或，所述PCR扩增的反应程序为92-95℃预变性3-6min，之后开始以下循环，每个循环的程序为：92-95℃变性20-40s，58-63℃退火20-40s，68-74℃延伸20-40s，循环共30-35个，循环结束后，70-74℃延伸8-12min，降温至4-15℃，结束。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述PCR扩增的反应体系为1×PCR反应缓冲液，12.5mmol/L Mg²⁺，0.25mmol/L dNTP，0.2μM所述引物，Taq酶0.04U/μL，所述模板40ng/μL；和/或，所述PCR扩增的反应程序为4℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s；循环共30个；循环结束后，72℃延伸10min，降温至12℃，结束。

8.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的检测为凝胶电泳检测；较佳地为琼脂糖凝胶电泳检测或聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；更佳地为1.5％琼脂糖凝胶电泳检测。

9.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的检测的判断方法如下：如果存在461bp位置的单一扩增产物，则说明待检样品中含有干酪乳杆菌菌株；如果不存在461bp位置的单一扩增产物，则待检样品中不含有干酪乳杆菌菌株。

10.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的待检样品为奶酪或酸奶。