[发明专利]一种抗QKI-5单克隆抗体及其制备与应用

说明书

本发明提供了一种抗QKI‑5的单克隆抗体，所述单克隆抗体由保藏在中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCC C2014228的杂交瘤细胞分泌。所述单克隆抗体特异性高，仅仅识别QKI‑5，对QKI的另外两种异构体QKI‑6和QKI‑7完全不识别，效价高，方便实验，且易于分离纯化。所述单克隆抗体的成功构建为把QKI‑5开发成为监测肿瘤发生发展重要诊断方式提供了极具意义的工具，也给科研人员在实验过程中排除非特异性识别干扰提供了便利的手段。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种抗QKI-5单克隆抗体及其制备与应用。

背景技术

单克隆抗体(Monoclonal Antibody，McAb)即单个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体。抗体主要由机体的B淋巴细胞合成，每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成该细胞的子孙，即克隆。如果选出一个合成一种抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞所合成的抗体即为单克隆抗体。

单克隆抗体的特点是：理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强、便于人为处理和质量控制，并且来源容易。

单克隆抗体技术是现代生命科学研究的重要工具，其在基因和蛋白质的结构和功能研究方面有着不可或缺的作用，成为解决生物学和医学等许多重大问题的重要手段，在人类和动物的免疫学诊断方面至今仍有着无可替代的重要作用。

单克隆抗体技术的基本原理为：小鼠受到外界抗原刺激后可诱导免疫反应，产生相应的抗体，这一职能是由B淋巴细胞来承担。肿瘤细胞在体外培养条件下可以无限传代，是永久细胞。把小鼠的骨髓瘤细胞与经过免疫的小鼠脾细胞在聚乙二醇等介导下发生融合，融合后的杂交瘤细胞具有两种细胞的特性，一方面可以分泌特异性的抗体，一方面也具备了肿瘤细胞无限增殖的能力、可在体外培养条件下或移植到体内无限增殖，从而分泌大量单克隆抗体。

免疫方法和筛选抗原是决定能否获得高亲和力、能识别天然抗原表位的单抗的重要因素。

QKI蛋白是一种重要的RNA结合蛋白，对胚胎和出生后的个体发育至关重要。QKI蛋白有三种异构体，根据其mRNA的3’非翻译区(3’-UTR)的长度分别命名为QKI-5，QKI-6和QKI-7。这三种蛋白在细胞内的定位各不相同，其中QKI-5主要定位于细胞核内，QKI-6在细胞核和细胞质均有分布，而QKI-7则主要定位于细胞质。此外，这三种异构体的表达还具有组织、细胞的特异性。神经细胞中主要含有QKI-6和QKI-7，而表皮细胞中则主要 是QKI-5。这三种异构体调控基因表达的分子机制并不相同。已有的报道发现癌组织中QKI的表达量往往低于癌旁组织，并且癌细胞往往是表皮细胞转化而来，故通过检测细胞、组织中的QKI-5的含量来预测、诊断癌症的发生发展，为癌症的早期诊断提供新的依据，并提供可能的治疗方案。另外，最新的研究结果显示，肺癌组织主要表达QKI-5，在肺癌早期病人中，QKI低表达的病例生存率显著降低，提示了QKI-5可以作为一个重要的预后标记物。因此，运用新的技术手段研究QKI-5在肿瘤诊疗方面的作用，具有深厚的潜力和深远的影响。

但是，由于QKI的三种异构体在N端保守，仅仅是C端十几个氨基酸有所不同，目前常见的商业化QKI抗体很难特异性地识别其中一种异构体，而往往是对三种异构体均有反应。

发明内容

本发明的目的在于提供一种仅仅特异性识别QKI-5的单克隆抗体及其制备与应用，所述抗体特异性高，仅仅识别QKI-5，对另外两种异构体QKI-6和QKI-7完全不识别，效价高，方便实验，且易于分离纯化。所述单克隆抗体的成功构建为把QKI-5开发成为监测肿瘤发生发展重要诊断方式提供了极具意义的工具，也给科研人员在实验过程中排除非特异性识别干扰提供了便利的手段。