[发明专利]转基因大豆GTS40-3-2及内外源基因的多重巢式荧光定量PCR检测引物组和方法

说明书

技术领域

本发明属于食品质量安全检测技术领域，具体涉及一种多重巢式荧光定量PCR检测试剂盒及应用，特别涉及一种转基因大豆GTS40-3-2及内外源基因的多重巢式荧光定量PCR检测引物组、试剂盒和检测方法。

背景技术

随着转基因作物的大量种植及应用，转基因产品开始大量进入我们的生活。在还不能确定转基因作物及其产品对人类健康和生态环境是否存在潜在的不利影响之前，对其检测以及标识对消费者非常重要。我国的转基因食品技术起步较晚，于2002年3月20日起施行《农业转基因生物标识管理办法》，要求对5类转基因生物所涉及的17种转基因产品进行标识，其中也包括了转基因棉花、转基因油菜籽、转基因玉米三种农作物。从目前发展情况来看，转基因检测未来必然向高通量、高灵敏度、定量、能够检测品系的方向发展。因此建立一套能够达到以上要求的方便、快捷转基因检测新技术是贯彻标识制度的重要前提。

近年来国内外用于转基因检测的主要方法是PCR、多重PCR、巢式PCR、荧光定量PCR等。以上基于PCR的方法都具有各自的优缺点，如多重PCR虽然提高了检测的通量，但体系内含多对引物，反应不稳定；荧光定量PCR具有定量能力，但由于探针的原因导致其检测通量偏低。因此，建立一套快速、准确、高通量、定量检测转基因的方法具有重要的意义。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种转基因大豆GTS40-3-2及内外源基因的多重巢式荧光定量PCR检测引物组。

本发明的另一个目的在于提供一种转基因大豆GTS40-3-2及内外源基因的多重巢式荧光定量PCR检测试剂盒；

本发明的再一个目的在于提供一种基于上述检测引物组和检测试剂盒的转基因大豆GTS40-3-2及内外源基因的多重巢式荧光定量PCR检测方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

转基因大豆GTS40-3-2及内外源基因的多重巢式荧光定量PCR检测引物组，包括大豆内源基因lectin外引物、大豆内源基因lectin内引物、品系特异性RRS外引物、品系特异性RRS内引物、CaMV35S启动子外引物、CaMV35S启动子内引物、NOS终止子外引物、NOS终止子内引物、CP4-EPSPS外引物和CP4-EPSPS内引物，其核苷酸序列分别如下所示：

lectin外引物的上游引物：AGTCGTCGCTGTTGAGTTTGA(SEQ ID No：1)；

lectin外引物的下游引物：ACCCACTCGGGAAGAGAAGTC(SEQ ID No：2)；

lectin内引物的上游引物：TGCCTCCACCAGCCTCTT(SEQ ID No：3)；

lectin内引物的下游引物：AGTCTTCAAATCGACCACATCG(SEQ ID No：4)；

RRS外引物的上游引物：ACCAGTGACCCTAATAGGCAACA(SEQ ID No：5)；

RRS外引物的下游引物：TGCGTGGTGAACTTTCTGTTGG(SEQ ID No：6)；

RRS内引物的上游引物：ACCAGTGACCCTAATAGGCAACA(SEQ ID No：7)；

RRS内引物的下游引物：AGTTCTTCTCCGATCCCAAATAG(SEQ ID No：8)；

CaMV35S启动子外引物的上游引物：ATTGATGTGATATCTCCACTGACGT(SEQ ID No：9)；

CaMV35S启动子外引物的下游引物：CCTCTCCAAATGAAATGAACTTCCT(SEQ ID No：10)；

CaMV35S启动子内引物的上游引物：TCTCCACTGACGTAAGGGATGA(SEQ ID No：11)；

CaMV35S启动子内引物的下游引物：GAAGGGTCTTGCGAAGGATAG(SEQ ID No：12)；

NOS终止子外引物的上游引物：TGCCGGTCTTGCGATGA(SEQ ID No：13)；

NOS终止子外引物的下游引物：AAATGTATAATTGCGGGACTCTAATC(SEQ ID No：14)；

NOS终止子内引物的上游引物：TGCCGGTCTTGCGATGA(SEQ ID No：15)；