[发明专利]一种抑制霉菌的酵母富集鉴定培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于自然界中酵母培养筛选方法领域，具体涉及到酵母的富集培养及分类鉴定培养基及其制备方法。

背景技术

酵母菌是一类广泛存在于自然环境中的真核微生物。在自然环境中存在大量有益的酵母菌，特别是葡萄园及葡萄浆果表面。同时在自然界中还存在大量其他微生物，包括细菌及霉菌、放线菌。在做野生酵母资源分类调查时，需要真实反映环境中野生酵母菌的种类、数量。但是酵母菌和霉菌同属真菌，生长环境相同，最适生长温度都在25-28度。因此在培养酵母菌时无法避免霉菌的污染，严重影响酵母种类观察及计数。在采集自然野生酵母时也需要多次分离纯化，费时费力。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提供一种能富集培养酵母菌，有效抑制霉菌、细菌及放线菌的酵母富集培养基。同时加入微量元素及显色剂，能够使不同属酵母表现出不同颜色及形态特征，对自然野生酵母进行初步分类鉴定。

一种抑制霉菌的酵母富集鉴定培养基，按重量百分比，

包括：1±0.2%酵母粉、2±0.2%蛋白胨、2±0.2%葡萄糖、2±0.2%琼脂、4±0.2%储液A 、0.1±0.2%储液B和2.2±0.2%丙酸钠，余量为水，自然pH为6.5±0.2。

优选的，所述储液A包括：磷酸二氢钾、氯化钾、氯化钙和硫酸镁。

优选的，所述储液B包括：氯化铁和硫酸锰。

本发明采用以上技术方案，其优点在于，储液A 为培养基提供必要的离子元素，储液B 为培养基提供必要的离子元素。丙酸钠能够有效抑制霉菌，但不影响酵母菌生长。采用本方案，能够有效抑制自然界中霉菌细菌的污染，达到酵母菌富集培养及初步鉴定的作用。

本发明还提供一种制备抑制霉菌的酵母富集鉴定培养基方法，包括以下几个步骤：

步骤A：按配方分别加入1±0.2%酵母粉、2±0.2%蛋白胨、2±0.2%葡萄糖、2±0.2%琼脂、水，混合均匀，按配方配制储液A、储液B；

步骤B：加入储液A和储液B，再加入丙酸钠，使培养基自然pH值达到6.5±0.2，121℃灭菌20分钟，灭菌后加入氯霉素和储液C。

本发明采用以上技术方案，其优点在于，配方中加了抑制霉菌的丙酸钠；传统需多次分离纯化以避免霉菌和细菌的污染；如果有霉菌的话，会污染整个培养皿。

优选的，所述储液C采用溶解于酒精的溴甲酚绿。

本发明进一步采用以上技术特征，其优点在于，储液C为显色剂，溴甲酚绿变色范围PH是3.8-5.4，酸式型为黄色，碱式型为蓝色。酵母在生长过程中是自身及周围环境酸碱值变化，引起菌落及周围的颜色变化。

本发明的有益效果：本方法将富集培养与分类鉴定有机结合，能够快速、简单、方便的从自然界中分离出各种酵母菌，同时进行有效分类。并且能够直观的从本培养基上观察到酵母菌的生态分布与种属多样性。对于从事自然界酵母资源调查的科研工作者提供快速的技术方法，同时也为酒厂或其他需要从自然环境中筛选酵母菌种的加工企业提供简单方便的筛选鉴定方法。

具体实施方式

下面对本发明的较优的实施例作进一步的详细说明：

实施例1

步骤A：配制基础培养基以及储液A、储液B；

步骤B：在常规酵母培养基（1%酵母粉、2%蛋白胨、2%葡萄糖、2%琼脂、余量为水），混合均匀后加入储液A和储液B。最后通过加入丙酸钠2.2%，使培养基自然pH值达到6.5。121℃灭菌20分钟，灭菌后加入氯霉素1%，储液C 0.1%。

具体配方为：

储液A：磷酸二氢钾5.5g、氯化钾4.25g、氯化钙1.25g、 硫酸镁1.25g 用水定容至400ml。

储液B：氯化铁0.25g、硫酸锰0.25g用水定容至100ml。

储液C：将0.44g溴甲酚绿溶解于20ml浓度为50%的酒精中。

新型培养基：按重量百分比：1%酵母粉、2%蛋白胨、2%葡萄糖、2%琼脂、4%储液A、0.1%储液B，自然pH为6.5。

对比实施例：

与实施例1不同的是：按上述配方配制培养基，仅改变丙酸钠添加的浓度。

实施例2：加入0.7%丙酸钠，自然PH值6.27，其它条件与实施例1相同；

实施例3：加入1.0%丙酸钠，自然PH值6.31，其它条件与实施例1相同；

实施例4：加入1.4%丙酸钠，自然PH值6.35，其它条件与实施例1相同；