[发明专利]焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及焦虑症生物标记物、筛选方法及试剂盒。

背景技术

广泛焦虑障碍(GAD)是一种以对许多事件或情境过分的和不可控制的担忧为特征的慢性疾病，同时伴有躯体症状，例如坐立不安，肌紧张，易激惹，注意集中困难和睡眠障碍等。GAD在普通人群中的年患病率为0.8–2.7％，已成为主要的公众健康问题。此外，GAD通常还伴有其他精神障碍(如：抑郁、其他焦虑障碍等)和躯体疾病(如：心血管疾病、神经系统疾病等)。50％的焦虑症患者合并其它精神障碍，例如抑郁。

已有研究表明，焦虑症病人若能早期明确诊断并及时得到有效治疗，可以显著改善患者的心理、生理、社会功能以及工作效率，并大大减少治疗费用。然而，目前对焦虑症的诊断仍是依靠其临床症状的主观评估，缺乏有效的客观诊断“金标准”，因而在临床上误诊、误治时有发生。另一方面，由于事先未知患者对哪种药物敏感，临床上不得不用“试错法”给药，这不仅影响患者的治疗效果，而且降低其服药依从性，并造成巨大的资源浪费。因此，有必要研发一种具有敏感性和特异性的生物标志物，来提高焦虑症的诊断科学性，并对其亚型加以区分，以便于有针对性地进行药物干预和开展临床科学研究。

miRNA是一种小分子的非编码RNA，长度为大约为22个碱基。 miRNA的生成包括两步剪切：首先细胞核内的miRNA基因转录成pri-miRNA，由细胞核内的酶DroshaRNase将其剪切成miRNA前体pre-miRNA。核内的转运蛋白将pre-miRNA转运到细胞质中，然后在细胞质中的另一种酶Dicer把miRNA前体剪切成双链miRNA，通过部分或完全地与靶mRNA的3'非翻译区(3'UTR)互补配对，阻止其翻译或使其降解，从而起到基因转录后调节的作用。约有50％的蛋白质编码基因受到miRNA的精确调控，多个miRNA分子可以共同调节一个基因的表达，一个miRNA分子亦可调控数百、上千个基因的表达。越来越多的研究证明，在大脑的发育、神经发生、神经元成熟及突触形成过程中，miRNA起关键的调控作用。进一步的研究表明，焦虑症的发生、发展中，miRNA亦起重要作用，并与抗焦虑药物的疗效有相关性。因此，某些MicroRNA可成为焦虑症诊断和预测抗焦虑药物治疗效果的生物标记物。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供焦虑症生物标记物。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：焦虑症生物标记物，所述标记物包括miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-4674、miRNA-501-3p、miRNA-663B和miRNA-4505。

在本发明的第二方面，提供了上述焦虑症生物标记物的筛选方法，包括以下步骤：取适量受试者血液，从中提取总RNA，并检测提取到的总RNA浓度；通过miRNA芯片筛查出差异性表达的7种miRNA；选取若干例焦虑症患者，设为病例组；选取若干例健康对照者，设为对照组；分别采集血样，提取出单核淋巴细胞中的总RNA后进行miRNA的反转录和荧光定量PCR检测，所得数据使用统计学方法进行分析，得到两组间表达水平有显著性差异的miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-4674、miRNA-501-3p、miRNA-663B和miRNA-4505。

在本发明的第三方面，提供了一种焦虑症诊断试剂盒，其能够测 定血液中miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-4674、miRNA-501-3p、miRNA-663B和miRNA-4505的表达水平。

在本发明的一个优选例中，上述试剂盒含有miRNA-1301、miRNA-4484、miRNA-4674、miRNA-501-3p、miRNA-663B和miRNA-4505的引物探针。

在本发明的一个优选例中，上述引物探针的序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

所述诊断试剂盒还可以包括PCR反应常用试剂，如Taq酶，逆转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl₂和DEPC水等；还可以含有标准品和/或对照品。

在本发明的一个优选例中，提供了序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示引物探针的用途，其用于制备焦虑症诊断试剂盒。