[发明专利]一组用于鼠李糖乳杆菌的实时荧光定量PCR检测的特异性引物和探针及检测试剂盒

权利要求书

1.一组用于鼠李糖乳杆菌的实时荧光定量PCR检测的特异性引物和探针，其特征在于：所述引物和探针的核苷酸序列如下：

上游引物：5’- GCGAATACGATTATCCTGGTGAT -3’；

下游引物：5’- AGGATCGCCTTCAAGTGCTTT -3’；

探针：5’- ATATTCCTGTTCTCCGCGGTTCTGCC -3’；

所述引物和探针扩增的目标核苷酸序列参见序列表中SEQ ID No.2。

2.根据权利要求所述的引物和探针，其特征在于：所述探针的5’端荧光报告基团是FAM、TET、JOE、HEX或VIC，3’端标记的是荧光淬灭基团TAMRA、DABCYL或BHQ。

3.一种鼠李糖乳杆菌的实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1所述的引物和探针。

4.权利要求3所述的试剂盒在定量检测鼠李糖乳杆菌含量中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述应用为定量检测益生菌酸奶、干酪中鼠李糖乳杆菌含量。

6.鼠李糖乳杆菌的实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于：步骤如下：

（1）制备标准品：将鼠李糖乳杆菌延伸因子tuf保守基因片段插入到载体pMD18-T中，获得含有tuf保守基因片段的重组质粒，以此作为标准品；所述鼠李糖乳杆菌tuf保守基因片段序列参见序列表中SEQ ID No.1的第529-982位核苷酸序列；

（2）标准曲线绘制；

（3）使用权利要求1所述的特异性引物和探针对待测样品和标准品采用相同的反应体系进行实时荧光PCR扩增；

（4）通过标准曲线和待测样品的Ct值进行鼠李糖乳杆菌的快速定量检测。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：所述鼠李糖乳杆菌tuf保守基因片段是通过以下引物扩增得到的：

上游引物为5'- TTGAAAGCACTTGAAGGCGA -3'；

下游引物为5'- TGGAGAAGAATGGCGTATGAC -3'。

8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：步骤（3）中所述引物和探针的用量均为1.6μl。

9.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：步骤（3）中所述实时荧光PCR扩增的反应条件为：94℃ 预变性2分钟，94℃ 15秒、60℃ 40s并收集荧光信号，40个循环。