[发明专利]一种青风藤指纹图谱的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于中药指纹图谱领域，特别涉及一种青风藤指纹图谱的测定方法。

背景技术

青风藤为防己科植物青藤或毛青藤等的藤茎。6至7月割取藤茎，除去细茎枝叶，晒干；或用水润透，切段，晒干。亦可秋冬采老藤，切段，晒干。晒干后的青风藤呈长圆柱形，微弯曲，细茎弯绕成束，长20至70厘米或更长，直径0.5至2厘米。表面绿褐色至棕褐色，有细纵纹及皮孔。节稍膨大，有分枝痕。体轻，质硬而脆，易折断，断面不平坦，灰黄色或淡灰棕色，皮部窄，木部射线放射状排列；髓部小，淡黄白色或黄棕色，气微，味苦。以条均匀者为佳。

现有技术中青风藤含量测定的标准在中国药典2010版中规定内容如下：

色谱条件与系统适用性试验：十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-磷酸盐缓冲液(0.005mol/L磷酸氢二钠溶液，以0.005moI/L的磷酸二氢钠调节pH值至8.0，再以1％三乙胺调节pH值至9.0)(55：45)为流动相；检测波长为262mn。理论板数按青藤碱峰计算应不低于1500。

对照品溶液的制备：精密称取青藤碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人70％乙醇20ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率20kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液5μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含青藤碱(C₁₉H₂₃O₄)不得少于0.50％。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种青风藤指纹图谱的测定方法，该方法在控制青风藤的质量，有效的指导临床和生产中使用、保证用药的有效、安全和可靠具有积极作用。

本发明的一种青风藤指纹图谱的测定方法，包括：

(1)取青风藤药材粉碎成中粉，精密称定，加入甲醇，超声溶解，过滤并蒸干，残渣用初始流动相溶解并定容，滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；

(2)取木兰花碱对照品、青藤碱对照品、四氢表小檗碱对照品，精密称定，分别加入甲醇制成对照品溶液；

(3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得青风藤指纹图谱；其中，色谱条件为：色谱柱：Waters Xselect CSH C18柱；柱温：30℃；检测波长：280nm；记录时间80min；进样体积：10μl；流速：1ml·min^-1；流动相：流动相A为0.1％甲酸水，流动相B为甲醇；梯度洗脱程序：从5％B开始等度洗脱18min，再以线性洗脱的方式经7min达到8％B，以线性洗脱的方式经35min达到20％B，以线性洗脱的方式经25min达到30％B。

所述步骤(1)中的青风藤中粉与乙醇的比例为0.05g:20ml。

所述步骤(2)中的甲醇的体积百分数为5％。

所述步骤(2)中的对照品溶液具体为：每1ml各含木兰花碱130ng、青藤碱80ng、四氢表小檗碱4ng的混合溶液。

所述步骤(3)中的Waters Xselect CSH C18柱的规格为4.6mm×250mm，填料粒度大小为5μm。

所述步骤(3)中的青风藤指纹图谱中11个色谱峰被确定为共有色谱峰，通过与对照品保留时间的比较，确定峰3为青藤碱，峰7为木兰花碱，峰10为四氢表小檗碱。

有益效果

本发明特对药材指纹图谱进行了研究，建立了液相指纹图谱测定条件，并进行了方法学考察，根据多批大生产样品，制订了青风藤液相指纹图谱标准，在生产过程中可有效的指导投料、规范生产操作，真正确保了临床用药的安全、有效、可靠，对所测得的指纹图谱的辨认，采用国家药典委员会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，操作方便、快捷，以其得出的相似度结果，对药材指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确。

附图说明

图1为10个批次青风藤指纹图谱；

图2为青风藤标准指纹图谱；其中，3为青藤碱；7为木兰花碱；10为四氢表小檗碱。

具体实施方式