[发明专利]一种虎纹蛙抗菌肽及其编码基因与应用

说明书

本发明提供了一种虎纹蛙抗菌肽及其编码基因与应用，该虎纹蛙抗菌肽的序列如SEQ ID NO：2所示，其编码基因SEQ ID NO：1所示；该虎纹蛙抗菌肽及其编码基因可用于制备病原微生物感染疾病的治疗药物。本发明虎纹蛙抗菌肽具有结构简单、人工合成方便、抗菌谱系广、抗菌活性强的特点。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种虎纹蛙抗菌肽及其编码基因与应用。

背景技术

近年来，随着传统抗生素抗药性的产生，人们开始日益关注抗菌肽的研究。抗菌肽是具有抗菌活性的一类短肽，广泛存在于生物界，是先天免疫的重要防御物质，具有广谱抗菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生虫及抗肿瘤等生物活性，且不易产生耐药性，作用机制具有抗生素无法比拟的优越性，能够杀灭已产生耐药性的细菌，并能选择性杀伤肿瘤细胞而不破坏正常细胞。两栖类动物的皮肤在自然进化过程中形成了抵御病原微生物感染的三套防御系统，而皮肤抗菌肽是其先天性免疫系统的重要组成部分。两栖类作为一类古老的生物，它们的后天获得性免疫系统与哺乳动物相比极为脆弱，它们在长期的进化历程中演化形成了一套非常有效的抵御微生物侵袭的防御系统，其中蛙皮抗菌肽是其先天防御系统的主要成分，具有高效、广谱、不易产生耐药性等特点。

经研究发现，抗菌肽对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色链球菌、大肠杆菌、粪链球菌、绿脓杆菌变形杆菌、草绿色链球菌、乙型溶血链球菌等40多个属均有抑制效果，部分抗菌肽对真菌有杀伤或杀灭作用。来源于非洲爪蟾的抗菌肽magainin以及来源于中国大蹼铃蟾的抗菌肽maximin在微摩尔浓度水平就对肿瘤细胞显示不同程度的杀伤作用。来源于日本马氏蟹血淋巴的抗polyphemusins和tachyplesin，在浓度5μg/mL时就对艾滋病病毒显示出一定的抑制作用。来源于中国大蹼铃蟾皮肤的抗菌maximin 3在浓度为1.5μg/mL时对抗艾滋病病毒的选择系数为7.6。这是首次报道的两栖类动物来源的抗艾滋病病毒抗菌肽。另外，从南美叶泡蛙皮肤得到的抗菌肽dermaseptin对疤疹病毒也显示强烈的抑制作用。来源于蜜蜂的蜂毒肽melitin具有强烈的红细胞溶解活性；来源于两栖类动物的抗菌肽，如中国大蹼铃蟾的抗菌肽maximin H和东方铃蟾的抗菌肽bombinH也显示了强烈的红细胞溶解活性。maximinH在50μg/m L时就可以导致兔红细胞100％的溶解。从两栖类动物Pseudisparadoxa得到的抗菌肽pseudin对控制蝌蚪尾部形态变化的细胞凋亡具有调节作用。Pseudin在结构上与一种细胞凋亡因子DEFY的一段区域显示出很高的相似性。

利用虎纹蛙资源进行虎纹蛙抗菌肽基因的cDNA克隆、序列分析的研究，如果能从虎纹蛙皮肤中获得具有重要价值的生物活性物质，必将拓宽虎纹蛙的开发、利用新途径，具有重要的现实意义，同时唤起人们对两栖类皮肤生物活性肽，尤其是我国特色物种的特殊分子多样性的关注，及重视它们在生物学、生物医学基础研究和天然药物开发中的意义。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种虎纹蛙抗菌肽。

本发明的之一目的在于提供上述虎纹蛙抗菌肽的编码基因。

本发明的之一目的提供上述虎纹蛙抗菌肽在做为制备病原微生物感染疾病的治疗药物方面的应用。

本发明的另一目的在于提供虎纹蛙抗菌肽的编码基因在治疗病原微生物感染疾病方面的应用。

本发明是这样实现的，一种虎纹蛙抗菌肽，其序列如SEQ ID NO：2所示。其中，本发明中的虎纹蛙抗菌肽(Frog1-蛋白)是中国两栖类动物虎纹蛙基因编码的一种单链多肽，分子量1367.673Da，等电点6.04。

本发明进一步提供了上述虎纹蛙抗菌肽的编码基因，其序列如SEQ ID NO：1所示。该编码基因的全氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，其中，所述虎纹蛙抗菌肽为该编码基因的第177～213位核苷酸。