[发明专利]检测人VEGF的组合试剂、试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学领域，特别是一种抗人VEGF的鼠单克隆抗体及由其组成的检测生物样品中人VEGF水平的组合试剂、试剂盒及其使用方法。

背景技术

在迄今发现的20多种多肽类血管生长因子中，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF, 也可写作VEGF-A) 是针对内皮细胞特异性最高，促血管生长作用最强的关键调节因子，在多种原发性恶性肿瘤组织中均呈高表达。此外，眼睛水状液和玻璃状液中VEGF的增加证实与各种视网膜病紧密关联（Aiello LP等, N Engl J Med, 1994, 331:1480-1487)。

VEGF是高度保守的同源二聚体糖蛋白，由两条分子量为24 kDa的单链以二硫键组成二聚体。人VEGF基因由8个外显子、7个内含子组成，由于mRNA剪切方式的不同，分别生成VEGF₁₂₁、VEGF₁₄₅、VEGF₁₆₅、VEGF₁₈₉、VEGF₂₀₆等至少5种蛋白异构体，其中VEGF₁₆₅是体内表达最多且生物活性最强的亚型。上述VEGF异构体NH₂末端115个氨基酸相同但COOH末端长度不同。VEGF₁₆₅分子量45 kDa，分泌型蛋白，可分泌进入血液循环，但也有相当一部分通过肝素结合部位结合于细胞表面和细胞外基质。VEGF₁₆₅ 和VEGF₁₈₉ 在纤溶酶作用下，裂解并释放出N-末端110氨基酸，这是其与受体结合的部位。VEGF通过与其3个高亲合力酪氨酸激酶受体(RTKs)，分别为VEGFR1(又称FLT1)、VEGFR2(又称KDR或Flk-l)和VEGFR3 (又称FLT4)结合而发挥作用。

1994年，Kondo等人首次报道了癌症病人血清中VEGF水平高于健康人群。后续的大量研究进一步表明VEGF可能是肿瘤广谱标志物(Tumor Marker)。因为在几乎所有实体肿瘤和部分非实体肿瘤病人中，其血液中VEGF浓度都有一定程度的增加(Kessler T等, Curr Drug Targets, 2007, 8:257-268)。这种趋势常见于肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、结直肠癌、乳腺癌、宫颈癌、尿道上皮癌症、鼻咽癌、头颈部癌、膀胱癌、胰腺癌、骨肉瘤、Ewing氏瘤、软骨肉瘤、巨细胞瘤、黑色素瘤、白血病包括T-细胞白血病和B-细胞白血病、肾细胞癌、多发性骨髓瘤、非何杰金氏瘤、Wilm氏瘤、血管肉瘤、前列腺癌、软组织肉瘤、卵巢癌、阴唇癌、宫颈癌、子宫内膜癌、艾滋病并发的卡波氏肉瘤等(Berkman RA等,1993, J Clin Invest, 91:153-159)。

VEGF分泌进入血液循环，因此其血液浓度检测可以作为肿瘤的广谱筛查、辅助诊断、预后、治疗疗效是否复发等情况的监测指标。VEGF在几乎所有实体肿瘤的血液中增加，符合广谱筛查的“广谱”。虽然临床应用C-12、C-5等作为肿瘤筛查，目前我国尚没有筛查谱比较广的单一血液肿瘤标志物。而在体检临床实践中，C-12和C-5包括瘤种还是有限的。VEGF今后可作为我国癌症预防的初筛， 从普通人群发现可疑肿瘤患者。为精查和进一步确诊提供较为可靠的依据、这样可以节省成本、增加筛查效率。另一方面，在我国癌症预防实践中，用于筛查常用方法有子宫颈癌巴士涂片、结直肠癌隐血试验、前列腺癌肛门指诊、食管癌拉网等。组织特异性肿瘤标志物有AFP（肝癌）、PSA（前列腺癌）、CA125（卵巢癌）等。VEGF不仅可作为这些肿瘤普查、而且还可作为上述方法不能普查到其它大部分肿瘤的普查方法， 如脑部肿瘤、骨科肿瘤、间皮瘤等。