[发明专利]引物组合物及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是分支杆菌鉴定技术领域。具体而言，涉及引物组合物及其用途，更具体的，本发明涉及引物组合物、试剂盒及其在对待测分支杆菌进行菌种鉴定中的用途，构建待测分支杆菌ITS区域核酸测序文库的方法，对待测分支杆菌进行菌种鉴定的方法、系统，以及同时对多个待测分支杆菌样本进行菌种鉴定的方法和系统。

背景技术

分枝杆菌是好氧的细胞内细菌生物类属，其在感染宿主后存活在单核细胞和巨噬细胞的内体区室(endosomal compartments)中。结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis)为革兰氏阳性细菌中分枝杆菌属(mycobacterium)的一个成员，而非结核性分枝杆菌(mycobacterium other than tuberculosis)是分枝杆菌属中除了结核杆菌以外细菌的统称。其中的鸟型结核菌(Mycobacterium avium complex)广泛的自艾滋病患的检体被分离到后，非结核性分枝杆菌才受到重视。非结核性分枝杆菌在环境中普遍存在且种类繁多，目前超过九十余种。

结核分枝杆菌(M.tuberculosis)及其复合群传染了世界人口的大约三分之一，约17亿人患结核病(Kochi，A.，结核(Tubercle)72：1-6(1991))，在世界范围内使更多人丧生(每年大约3百万)(发病率与死亡率周报(Morbidity and Mortality Weekly Report)42：961-964(1993))；其它治病性分枝杆菌如鸟分枝杆菌(M.avium)复合体(MAC)、副结核分枝杆菌(M.paratuberculosis)、溃疡分枝杆菌(M.ulcerans)、麻风分枝杆菌(M.leprae)、堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii)、海分枝杆菌(M.marinum)、玛尔摩尔分枝杆菌(M.malmoense)和偶发分枝杆菌复合体也是常见的病原体(参见：Wayne，L.G.，临床微生物学综述(Clin.Micro.Rev.)5：1-25(1992)或Falkinham，J.O.，临床微生物学综述9：177-215(199)关于不同分枝杆菌病原体的综述)，主要易感者是慢性呼吸道疾患(COPD、肺结核残余空洞、矽肺、支气管扩张症、肺囊性纤维化等)和免疫抑制特别是AIDS患者。鸟分枝杆菌复合群(Mycobacterium avium)在所有晚期AIDS患者的几乎半数中引起传播性疾病(Nightingale，S.D.等人，传染病杂志(Jour.Infect.Dis.)165：1082-1085(1992))。世界卫生组织估计，到2000年为止感染人免疫缺陷病毒(HIV)的人数将超过4千万(世界卫生组织(文件WHO/GPA/CNP/EVA/93.1)全球AIDS计划(1993))。副结核分枝杆菌(鸟分枝杆菌的一个亚种)在反刍动物中引起副结核病，引起农产品加工业(例如，牛奶和牛肉)每年损失，耗费了大量的社会费用。

人类分枝杆菌疾病包括结核病(由结核分枝杆菌M.tuberculosis引起)、麻疯病(由麻疯分枝杆菌M.leprae引起)、Bairnsdale溃疡病(由溃疡分枝杆菌M.ulcerans引起)和由海分枝杆菌(Emarinum)、堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii)、瘰病分枝杆菌(M.scrofulaceum)、苏尔加分枝杆菌(M.szulgai)、蟾蜍分枝杆菌(M.xenopi)、偶发分枝杆菌(M.fortuitum)、龟分支杆菌(M.chelonei)、嗜血分枝杆菌(M.haemophilum)和胞内分枝杆菌(M.intracellulare)引起的各种感染。证据显示，非结核性分枝杆菌所引发的院内传染正逐步增加，且所导致的状况已由无害的移生转变成具侵害性的感染。此外，非结核性分枝杆菌亦可造成微生物检体的污染而导致不必要的治疗及可能有害的诊断步骤。分析菌株的种类及检体来源可协助确认菌群的重要性，一旦怀疑发生突发(out-break)或假性群突发，分析技术应可迅速确认来源及确定适当的控制措施。

因此，目前结核分枝杆菌鉴定、与非结核分枝杆菌的鉴别，受到广泛关注，成为研究热点，越来越多的从基因层面，采用分子生物学技术进行研究及产品研发，不仅突破了结核与非结核自身生长时间长、条件苛刻的局限，甚至比优化过的液体培养时间更短。

然而，目前的分枝杆菌鉴定方法仍有待改进。

发明内容

本发明是基于发明人的下列发现而完成的：