[发明专利]EPS8抗肿瘤CTL表位肽及其应用

说明书

本申请是申请日为2013年12月23日、申请号为201310717092.0、发明名称为EPS8抗肿瘤CTL表位肽及其应用的中国发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明属于生物化学领域中的多肽技术领域，具体涉及一种EPS8来源的抗肿瘤CTL表位肽及其在制备治疗肿瘤药物中的应用。

背景技术

恶性肿瘤是新世纪人类的第一杀手。手术、放疗及化疗等传统治疗方法对某些肿瘤尤其是晚期恶性肿瘤的治疗效果尚不理想。近年来，细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T Lymphocyte,CTL)在抑制肿瘤中的作用受到极大重视，如何有效激发CTL介导的特异性细胞免疫应答，发挥抗肿瘤效能，已经成为当今肿瘤治疗性多肽疫苗研制领域的一个重要课题。

肿瘤抗原的发现及其CTL表位的鉴定是肿瘤特异性免疫治疗以及肿瘤治疗性多肽疫苗研制的重要前提。表皮生长因子受体通路底物No.8(Epidermal Growth Factor Receptor pathway substrate No.8，EPS8)是表皮生长因子受体(EGFR)重要的激酶活性底物之一。近年研究显示，EPS8在多种实体瘤(如宫颈癌、结直肠癌、垂体瘤、口腔鳞癌、胰腺导管癌、乳腺癌、甲状腺癌、食管癌及恶性胶质瘤等)及血液系统肿瘤(如多发性骨髓瘤、急性髓系白血病、混合系白血病等)的组织及细胞中表达异常升高，而在正常组织表达很低或无表达。进一步的研究显示，EPS8通过调控细胞周期促进肿瘤细胞的增殖，通过参与细胞伪足的形成及与肌动蛋白的相互作用促进肿瘤细胞的转移，通过影响肿瘤细胞对化疗药物的耐受性与患者的预后相关(Li Y*,Xue T,He Y,Du J.A novel oncoprotein Eps8:new target for anti-cancer therapy.Future Oncology.2013(Accepted))。此外，本课题组在前期的实验研究中发现，重组小鼠rmHis-Eps8蛋白疫苗可有效诱导荷4T1乳腺癌小鼠产生特异性抗肿瘤免疫应答，抑制小鼠体内肿瘤细胞的增殖，延长其生存时间，而对小鼠脑、心、肝、肾、小肠、附睾组织无明显的毒性作用。(He YJ,Zhou J,Li Y*,et al.Eps8vaccine exerts prophylactic antitumor effects in a murine model:a novel vaccine for breast carcinoma.Mol Med Rep.2013Aug；8(2):662-8)。因此，EPS8是肿瘤诊断和抗肿瘤治疗的新靶点，在肿瘤免疫治疗中具有巨大潜力。

免疫原性弱和免疫耐受极大地限制了天然CTL表位在肿瘤治疗性多肽疫苗中的应用，因此，有效提高天然CTL表位的免疫原性并打破机体的免疫耐受成为肿瘤治疗性多肽疫苗发展的关键。在众多肿瘤治疗性多肽疫苗的增强策略中，对天然CTL表位进行分子改造被认为是最行之有效的方法之一。由于CTL表位与主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ类分子的结合是诱导CTL免疫应答的关键因素，而CTL表位与MHC-Ⅰ类分子结合的重要基础是锚定残基，因此，可通过改变锚定残基或其相邻位置的氨基酸残基以达到增强免疫原性而不影响特异性的目的。研究发现，在九肽CTL表位中，第二位及第九位为HLA-A2.1分子的主要锚定位点，二位为Leu或Met，九位为Leu、Val或Ile，能将表位与MHC结合的能力提高10～100倍，而在一位引入Tyr则可依靠其侧链苯环的疏水作用以及酚羟基的氢键作用增强表位肽与HLA分子的相互作用。

本申请主要采用理论和实验相结合的方法，修饰并初步鉴定出与MHC-Ⅰ类分子具有强结合力并有效诱导抗肿瘤免疫应答的EPS8来源的候选CTL表位肽及其类似物。

发明内容

本发明所要解决的一个技术问题是针对上述的技术现状而提供一种肿瘤抗原EPS8来源的HLA-A*0201限制性CTL表位，该表位能够以高亲和力结合HLA-A*0201分子，所形成的复合物稳定，能够诱导肽特异性的CTL免疫应答，表现为刺激肽特异性CTL分泌高水平的IFN-γ并对肿瘤细胞产生特异性杀伤效应。

本发明所要解决的另一个技术问题是针对上述的技术现状而提供一种在肿瘤原EPS8来源的HLA-A*0201限制性CTL表位肽在制备治疗肿瘤药物中的应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：