[实用新型]猪圆环病毒2型和猪蓝耳病毒IgM抗体的胶体金免疫层析检测试纸

说明书

技术领域

本实用新型属于兽用疫病检测技术领域，具体涉及一种猪圆环病毒2型和猪蓝耳病毒IgM抗体的胶体金免疫层析检测试纸。

背景技术

猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV2）是引发断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaningmultisystemic wasting syndrome，PMWS）的主要病原，该病主要以患畜生长缓慢、进行性消瘦和多系统病例损伤为特征。除了引发PMWS外，PCV2还与仔猪先天性震颤、猪皮炎肾炎综合征、猪呼吸道综合征、母猪繁殖障碍等疾病相关。PCV基因组由一条共价闭合环状单股DNA构成，包含两个大的开放阅读框架ORF1和ORF2，分别编码病毒蛋白复制酶（Rep）和病毒衣壳蛋白（Cap）。Cap蛋白是病毒的主要结构蛋白，含有4个抗原表位，具有较好的免疫原性和抗原性，是检测该病毒特异性抗体的理想靶抗原。检测PCV2的衣壳蛋白抗体可以反映PCV2的抗体水平，对猪群PCV2抗体水平进行监测，可确切了解猪体免疫水平或感染状况，制定最适免疫程序或淘汰选育，有效预防和控制PCV2的侵袭和传播，避免因此而引起的重大经济损失。

猪蓝耳病，即猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种严重危害养猪业的传染病。该病以怀孕母猪流产、早产、死胎和木乃伊胎等繁殖障碍以及仔猪呼吸困难、高死亡率和育肥猪呼吸异常为特征，也称“猪不孕与流产综合征”。PRRSV现已遍布于全世界主要养猪国家和地区，已经成为威胁养猪业健康发展的主要疫病之一。PRRSV是动脉炎病毒科、动脉炎病毒属的单股正链RNA病毒。其全基因组长约15kb，含有9个开放阅读框（ORFs）。其中，N蛋白也称核衣壳蛋白，约15kD，由0RF7编码，在病毒粒子中含量较高，N基因高度保守。N蛋白之间形成同源二聚体，对病毒的组装至关重要，可以诱导机体产生细胞免疫作用。是检测该病毒特异性抗体的理想靶抗原。

胶体金免疫层析方法是一种很成熟的实验检测方法，以其特异性强、成本低，操作简便，结果可靠、可单份或成批测定、不需任何仪器等优点已被广泛接受。国内有相关圆环和蓝耳的胶体金检测试纸的研究报道，但是都限于检测IgG抗体，不能检测其早期感染情况。猪圆环病毒和猪蓝耳病毒IgM抗体的检测对相关疫苗效果的评价和动物疫病流行病的检测与调查具有重要意义。

实用新型内容

本实用新型的目的是为了提供一种快速、有效、同时检测猪圆环病毒IgM抗体和猪蓝耳病毒IgM抗体的胶体金免疫层析检测试纸。

为了实现上述目的，本实用新型采用如下技术方案：

猪圆环病毒2型和猪蓝耳病毒IgM抗体的胶体金免疫层析检测试纸，包括样品吸收区、金标探针区、固相化抗原及抗体区和吸水区和支撑板，样品吸收区、金标探针区、固相化抗原抗体区和吸水区铺设在支撑板上并依次相互部分重叠；所述的金标探针区包被有胶体金标记的小鼠抗猪IgM单克隆抗体，标计量优选为每mL胶体金标记5～20μg小鼠抗猪IgM单抗，金标探针包被量优选为5～15μL；所述的固相化抗原及抗体区上有检测线T1、检测线T2和对照线C，对照线C靠近吸水区；所述的检测线T1和检测线T2分别包被猪圆环病毒2型Cap蛋白和猪蓝耳病毒N蛋白，对照线C包被羊抗小鼠IgG纯化抗体；猪圆环病毒2型Cap蛋白和猪蓝耳病毒N蛋白的包被量均优选为0.5～5μg，羊抗小鼠IgG纯化抗体的包被量优选为1～10μg。

所述的支撑板的材料优选为粘有一层聚氯乙烯衬膜的聚乙烯板；所述的样品吸收区的材料优选为玻璃纤维膜；所述的金标探针区的材料优选为聚酯膜；所述的固相化抗原和抗体区的材料优选为硝酸纤维素膜；所述的吸水区的材料优选为吸水滤纸。

上述的猪圆环病毒2型Cap蛋白和猪蓝耳病毒N蛋白均为高纯度的杆状病毒表达蛋白，可按照本领域常规技术制备或购买市售产品均可。

上述的小鼠抗猪IgM单克隆抗体可按照本领域常规技术制备或购买市售产品均可。

本实用新型采用胶体金免疫层析间接法，将胶体金标记的小鼠抗猪IgM单克隆抗体包被在聚酯膜上，可与待检样品中的猪IgM抗体形成“金-二抗-抗体”复合物；将猪圆环病毒2型Cap蛋白和猪蓝耳病毒N蛋白分别包被到两条检测线，能分别捕获特异的猪抗体，形成“金-二抗-抗体-抗原”复合物；羊抗小鼠IgG纯化抗体包被到质控线作对照用。对照线出现红色，表明试纸有效，如果待检样品中含有相应的抗体，检测线会分别显红色，反之，检测线不显色。