[实用新型]一种单核细胞增生性李斯特菌免疫PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于生物技术和免疫学领域，具体涉及一种检测单核细胞增生性李斯特菌的免疫PCR检测试剂盒。

背景技术

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种短小的革兰氏阳性无芽胞兼性厌氧杆菌，是李斯特菌属中致病力最强的细菌，也是唯一对人致病的、典型的胞内寄生菌，可以导致严重的人畜共患传染病，如脑膜炎、败血症、流产和单核细胞增多等症状。1988年，世界卫生组织(World Health Organization，WHO)发表“食源性李斯特菌病劝告书”，指导全世界各国如何预防李斯特菌污染和中毒。自此，LM成为新的重要的食源性疾病病原菌，WHO将其与E.coli O157、沙门氏菌以及金黄色葡萄球菌并列为20世纪90年代四大食源性致病菌。该菌主要污染牛奶及乳制品、乳酪制品、肉制品香肠、加工禽类、生肉、鱼、虾、烟熏鱼、生蔬菜。目前单核细胞增生李斯特菌的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。

免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但是检测产品全部依赖进口，我国目前尚无拥有完全自主知识产权，且可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以单核细胞增生李斯特菌为检测靶标，所要求保护的技术涉及单核细胞增生性李斯特菌快速检测产品。

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种快速，准确地可快捷检测单核细胞增生性李斯特菌的检测试剂盒。本实用新型将致病菌免疫富集方法和基因水平检测方法有效结合，先用特异性抗体将样品中的病原菌特异性免疫富集，然后PCR扩增，这不仅很大程度提高了检测灵敏度，而且也提高了检测的特异性，大大提高了病原菌检测的效率。

具体而言，本实用新型提供了一种单核细胞增生性李斯特菌免疫PCR检测试剂盒，它包括盒体(1)，所述盒体(1)内设有衬垫(2)，所述衬垫上设有数个容器孔，所述容器孔内分别设有10×PCR Buffer(3)、dNTP(4)、TaqDNA聚合酶(5)、ddH₂O双蒸水(6)、正向引物(7)、反向引物(8)、阳性对照溶液(9)、阴性对照溶液(10)和自封袋(11)，所述自封袋(11)内设有包被了抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体的免疫PCR管。

在一优选例中，所述的抗单核细胞增生性李斯特菌单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系6D4H7C8B6，CGMCC No.8002或1B4E7A6C9，CGMCC No.8765产生。

本实用新型的有益效果如下：

本实用新型的单核细胞增生性李斯特菌免疫PCR检测试剂盒集病原菌浓缩、特异性抗体识别以及PCR扩增为一体，具有检测结果准确性高、特异性强、灵敏度高以及检测快速、使用方便等优点，弥补了现有食源性致病菌检测技术费时耗力、灵敏度低的不足。

本实用新型的单核细胞增生性李斯特菌免疫PCR检测试剂盒适用于菌株快速鉴定、食品中毒源检测等诸多领域，尤其适用于样品中微量病原体的快速检测。可供质监部门、进出口检疫部门等用于检测食样中的单核细胞增生性李斯特菌。

本实用新型各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本实用新型的特点、目的和优势将更为明显。

附图说明

图1是本实用新型的检测试剂盒的结构示意图；

图2是本实用新型的检测试剂盒的使用流程和原理图。

附图标记释义：1.盒体；2.衬垫；3.10×PCR Buffer；4.dNTP；5.TaqDNA聚合酶；6.ddH₂O双蒸水；7.正向引物；8.反向引物；9.阳性对照溶液；10.阴性对照溶液；11.自封袋。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本实用新型。应理解，这些实施例仅用于说明本实用新型而不用于限制本实用新型的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室指南(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本实用新型中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1.本实用新型的检测试剂盒的制备