[实用新型]用于检测PNH克隆的试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于分子生物学技术领域，涉及一种用于检测PNH克隆的试剂盒。

背景技术

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种特殊的获得性克隆性造血干细胞疾病，该疾病是由于PIGA基因体细胞突变，导致连接细胞膜的GPI相关锚蛋白缺失所致。最初PNH的检测主要集中检测红细胞相关的实验：如Ham实验和蔗糖溶血实验。这两种检测手段都提示红细胞对补体介导的溶血敏感度增加。但二者都不是特异性检测，且操作不方便。流式细胞术是检测GPI相关锚蛋白缺失的方法之一，同时也是诊断PNH所必需的检测指标。目前常用的检测方法为流式细胞术检测红细胞及白细胞表面CD55和CD59的缺失情况。虽然CD55和CD59被广泛用于检测血细胞中的PNH克隆细胞，有数据表明，二者联合应用也可能无法检测出微量PNH克隆细胞。

实用新型内容

为了解决上述技术问题，本实用新型的目的在于提供一种用于检测PNH克隆的试剂盒，可以快速、简便、准确、高灵敏性检测。

为实现上述目的，本实用新型采取的技术方案是：一种用于检测PNH克隆的的试剂盒，其包括盒体(1)、盒盖(3)和设置在盒体(1)内的衬垫(2)，所述衬垫(2)上设有小孔，装有GlyA FITC抗体的试剂管(4)、装有CD59 PE抗体的试剂管(5)、装有FLAER抗体的试剂管(6)、装有CD24 PE抗体的试剂管(7)，装有CD33 APC抗体的试剂管(8)装有CD14 APC-CY7抗体的试剂管(9)，装有CD45 PerCP抗体的试剂管(10)，装有红细胞裂解液的试剂管(11)，装有PBS缓冲液的试剂管(12)被设置在所述小孔内。

其中，所述衬垫(2)上设有9个小孔，所述小孔在所述衬垫(2)上分成3排平行排列。

通过以上技术方案，本实用新型的有益效果如下：

(1)本实用新型的试剂盒结构简单、设计合理，方便携带、保存，不易受污染。

(2)本实用新型的试剂盒在检测PNH克隆时检测灵敏度高，结果分析方法简单、直观，便于在临床推广应用。

附图说明

图1为本实用新型的结构示意图；

图中，1-盒体，3-盒盖，2-衬垫，4-装有GlyA FITC抗体的试剂管，5-装有CD59 PE抗体的试剂管，6-装有FLAER抗体的试剂管，7-装有CD24 PE抗体的试剂管，8-装有CD33 APC抗体的试剂管，9-装有CD14 APC-CY7抗体的试剂管，10-装有CD45 PerCP抗体的试剂管，11-装有红细胞裂解液的试剂管，12-装有PBS缓冲液的试剂管。

图2为采用本实用新型的试剂盒的人体内正常红细胞的示意图；

图3为采用本实用新型的试剂盒的人体内正常白细胞的示意图；

图4为采用本实用新型的试剂盒的PNH克隆患者的红细胞的示意图；

图5为采用本实用新型的试剂盒的PNH克隆患者的白细胞的示意图。

具体实施方式

下面结合实施例对本实用新型的具体实施方式作进一步描述，本实用新型的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本实用新型的范围构成任何限制。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

如图1所示，本实用新型提供了一种用于检测PNH克隆的试剂盒，包括盒体1、盒盖3和设置在盒体1内的衬垫2，所述衬垫2上设有9个小孔，所述小孔在所述衬垫2上分成三排平行排列，装有GlyA FITC抗体的试剂管4、装有CD59 PE抗体的试剂管5、装有FLAER抗体的试剂管6、装有CD24PE抗体的试剂管7，装有CD33 APC抗体的试剂管8，装有CD14 APC-CY7抗体的试剂管9，装有CD45 PerCP抗体的试剂管10，装有红细胞裂解液的试剂管11，装有PBS缓冲液的试剂管12被设置在所述小孔内。

本发明采用流式细胞术高灵敏性地检测PNH克隆，从而更好地辅助临床诊断。数据表明，检测白细胞GPI相关锚蛋白缺失的最好的试剂为含有荧光标记的无活性嗜水气单胞菌溶素前体的变异体，即FLAER，可特异结合于GPI锚连蛋白。与其余试剂相比，FLAER的灵敏度更高，它还可以与其它单克隆试剂联合使用，提高特异性，从而使结论更加准确。对于红细胞检测灵敏性的提高，我们在之前通过细胞大小和颗粒性设门的基础上，再用GlyA进一步标记红细胞，利用敏感性相对较高的CD59确定有无红细胞PNH克隆。

检测步骤如下：