[实用新型]一种抗MPO-ANCA抗体免疫层析试纸条

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种层析试纸条，属于医学免疫分析检测领域。

背景技术

炎症性肠病(inflammatoryboweldisease，IBD)是一种病因尚不十分清楚的慢性非特异性肠道炎性疾病，包括溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis，UC)和克罗恩病(Crohn′sdisease，CD)。

IBD是北美和欧洲的常见病，近30年来日本IBD发病率亦呈逐步增高趋势，我国虽尚无普通人群的流行病学资料，但近10多年来本病就诊人数呈逐步增加趋势则非常明显。IBD的临床表现复杂多样，不仅有消化道症状，还可有肠外表现。由于症状为腹痛、腹泻、便血等非特异性肠炎表现，CD与UC，以及IBD与结核性肠炎等其他肠道慢性疾病很难鉴别诊断。

近年来关于血清特异性抗体标记物的研究较多，包括核周型抗中性粒细胞抗体(Perinuclearanti-neutrophilcytoplasmicantibody，pANCA)、抗酿酒酵母抗体(anti-SaccharomycescerevisiaeimmunoglobulinA，anti-ASCA)、抗胰腺腺泡抗体(PAB)、抗细胞外膜蛋白复合物抗体(anti-OmpC)、I2抗体等。pANCA是以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为抗原的自身抗体，与IBD相关的pANCA为非典型ANCA，在IBD中的阳性率目前的报道各不相同，UC的pANCA阳性率在27～83％之间，CD则为0～24％。造成各个实验室检测结果差异的原因可能与研究对象的种族，人群选择及研究样本量的不同有关，更主要的是与检测方法的不同有关。与UC相关的pANCA靶抗原主要是髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)和通透性杀菌蛋白(bactericidal/permeability-increasingprotein，BPI-ANCA)，文献报道UC患者中抗MPO-ANCA的阳性率为10～25％，以IgG型为主。文献报道抗MPO-ANCA抗体的检测方法有两种，酶联免疫吸附法(ELISA)及间接免疫荧光(Indirectimmunofluorescence，IFA)检测技术。ELISA法检测可用于高通量标本测定，灵敏度也比较高，目前也被广泛认可，但其操作比较繁琐，需要多次加样洗涤及孵育步骤，完成整个实验过程需要3小时左右，需要酶标仪，对于实验人员专业技术要求比较高，同时受到各种环境条件的影响，对实验带来诸多不便。

间接免疫荧光检测技术是把抗原细胞固定在载玻片上，荧光染色用荧光显微镜进行观察，该技术具有高特异性，但由于显微镜观察需要主观判断，对检验人员的要求高，并且依赖于荧光显微镜，使用不便。

免疫层析法(immunochromatography)是近几年来兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的纤维素一端浸入样品(尿液或血清)后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，形成肉眼可见的检测带。现有的免疫层析试纸条产品常用的示踪标记粒子有纳米金、纳米硒、彩色胶乳等等，其中以纳米金应用最为广泛，纳米金也称为胶体金。

以胶体金作为失踪标记物的免疫层析技术特称为免疫胶体金技术(Immunecolloidalgoldtechnique，GICT)。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态而得名。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。胶体金层析法的优点主要包括：(1)使用方便快速，便于基层使用和现场使用，所有反应能在15分钟内完成；(2)成本低，不需要特殊的仪器设备；(3)应用范围广，可适应多种检测条件；(4)可以进行多项检测，若阳性样本比较难获得，多项检测可以节省样品，降低成本；(5)标记物稳定，标记样品在4℃贮存两年年以上，无信号衰减现象；(6)胶体金本身为红色，不需要加入发色试剂，省却了酶标的致癌性底物及终止液的步骤，对人体无毒害。