[实用新型]淋巴细胞微核实验用的微量培养装置及淋巴细胞微核实验用试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于生物技术领域，具体而言，涉及淋巴细胞微核实验用的微量培养装置及淋巴细胞微核实验用试剂盒。

背景技术

微核是指位于细胞浆中独立于主核的核小体，主要由外界损害因素(辐射或化学致癌物等)作用细胞后，导致细胞染色体丢失或断裂，从而在胞浆中形成1个或数个小核。它是由染色体、染色单体的无着丝粒断片或纺锤体损伤后造成滞后染色体，在细胞分裂中未包被于主核中而形成的。它通常被认为是染色体断裂和丢失的标志，因此常被用于评估接触射线或致癌物后的遗传损伤改变和致癌的风险性评估。

具体而言，微核检测的意义在于：(1)监测致癌物或放射性物质暴露人群的染色体损伤状态；(2)提供个体染色体损伤的程度，评估致癌物暴露人群的健康风险，为早期就诊提供依据；(3)完善肿瘤或者血液系统疾病患者的治疗前评估的指标；(4)肿瘤患者的临床治疗效果的评价；(5)致癌物或化学污染物暴露人群健康状况的动态观察。

人体外周血中的淋巴细胞一般处在G0期，不具备分裂能力，但在体外培养过程中加入植物凝集素(PHA)后，PHA会刺激淋巴细胞增殖，从而进入有丝分裂阶段。经过一段时间培养后，加入细胞松弛素B，经过低渗和固定处理就可以获得淋巴细胞微核涂片。

微核实验的数据分析一般需要计数1000～2000个双核细胞进行评估，而人外周血中的淋巴细胞数目为1000～2500个/μL，并且在体外培养过程中细胞还会经过一个指数生长阶段，所以理论上仅需要微量的外周血即可以达到实验室微核的检测分析目的。但是，目前实验室中多应用装有5ml培养基的培养瓶(见图2A)进行淋巴细胞培养，而这样的培养瓶通常需要接种0.4～0.5ml的全血量，以2～3张微核玻片计算，至少每张玻片中的双核细 胞数目为5000～7000个，但在计数分析阶段，并不会计数超出的细胞数目，从而造成多用的血液量的无端浪费。因此，需要开发出适用于更少量全血接种量的微核实验用的培养装置。

另外，细胞培养需要无微生物污染环境，即需要对所需细胞进行无菌的隔离培养，以避免环境例如空气中的各种微生物进入细胞培养体系，导致微生物污染。在疾病控制的现场工作环境中，由于条件简陋而通常很难通过外部设备保证无菌的条件。但是，现有技术中的培养瓶通常采用铝制的一体外壳(见图2B)，其在使用时不易去除，而且在去除过程中可能会影响内部橡胶塞的密封，从而导致瓶口附近的污染，并且由于高度/直径比较小，因此在培养过程中晃动时，培养液极易接触到瓶口，从而影响淋巴细胞的培养。为此，还需要能够简单、有效的能够保证无微生物污染的微核实验用的培养装置。

发明内容

为了解决上述现有技术中存在的问题，本实用新型的发明者们进行了反复研究，结果发现当采用瓶体高度与底面直径比为3～8∶1的长圆柱状的微量培养瓶时，不仅能够以微量的全血量进行淋巴细胞培养，而且能够保证淋巴细胞更好地无污染生长，从而完成了本实用新型。

具体而言，本实用新型涉及下述的技术方案。

(1)一种淋巴细胞微核实验用的微量培养装置，其特征在于，包含透明瓶体、弹性密封塞、位于弹性密封塞外侧并与瓶口锁扣的硬质外盖、以及装在透明瓶体内的2～4ml的微核实验用培养基，所述透明瓶体为长圆柱状且瓶体高度(H)与底面直径(D)比即H/D为3～8∶1，所述硬质外盖的上表面中心处具有能够去除的脱离部，所述培养基填充至瓶体高度的2/5～3/4。

(2)根据上述(1)所述的培养装置，其中，所述H/D为4～7∶1。

(3)根据上述(2)所述的培养装置，其中，所述H/D为5～6∶1。

(4)根据上述(1)所述的培养装置，其中，所述培养基为3ml。

(5)根据上述(1)所述的培养装置，其中，所述培养基填充至瓶体高度的1/2～2/3。

(6)根据上述(1)所述的培养装置，其中，所述培养基含有培养液、 胎牛血清或小牛血清、植物血凝素、抗生素和pH缓冲液。

(7)一种淋巴细胞微核实验用试剂盒，其特征在于，包含上述(1)～(5)中任一项所述的微量培养装置、装有细胞松弛素-B的试剂瓶和装有氯化钾的试剂瓶。

(8)根据上述(7)所述的淋巴细胞微核实验用试剂盒，其进一步包含装有固定液的试剂瓶、载玻片和/或注射器。

(9)根据上述(8)所述的淋巴细胞微核实验用试剂盒，所述固定液为甲醇或甲醇与冰醋酸的混合溶液。