[发明专利]一种根据分裂行为对体外受精治疗胚胎进行评估的等级分类方法

说明书

技术领域

本发明涉及辅助生殖技术中接受体外受精治疗患者胚胎的评估与用于移植的优质胚胎的选择，具体是对治疗中经时差成像技术观察的胚胎依据分裂行为的异常模式进行等级划分，筛选胚胎进行移植的方法。

背景技术

体外受精-胚胎移植(IVF-ET)已成为不孕症治疗的常规手段。传统的方法往往依赖于同时移植多个胚胎以提高妊娠率，但多胚胎移植导致多胎妊娠率增高，使母亲和胎儿的医源性并发症风险增加，可行的办法是建立一种有效的胚胎评估方法在卵裂期选择优质胚胎进行移植。传统的卵裂期静态形态学胚胎筛选体系是利用原核形态，第三天胚胎卵裂球数目、对称性、碎片多少等对胚胎进行评估和选择。但该方法存在评估指标单一，主观性大，无法准确判断胚胎发育潜能的缺点。时差技术(time-lapse)是一种瞬时曝光连续拍摄的成像技术，利用该技术能获取胚胎发育各个阶段的形态以及各事件发生的特定时间，并将所有记录照片合并成动态视频，实现对胚胎发育过程的全程监控。而目前已有的利用时差技术的形态动力学胚胎评估筛选方法是利用胚胎发育过程中的卵裂时间(如受精至五细胞形成的时间)、卵裂同步性(如从三细胞形成至四细胞形成的时间)等指标对胚胎进行评估。但是该方法存在如下缺点：形态动力学指标受多种因素，如培养系统、病人年龄、卵子成熟情况、授精方式、促排方案等的影响。仅有少数指标得到一致认可，且同一指标的范围存在一定波动。因此形态动力学指标在各实验室无法通用。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种根据分裂行为对体外受精治疗胚胎进行评估的等级分类方法。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为；

所述根据分裂行为对体外受精治疗胚胎进行评估的等级分类方法是将受精后第一天的胚胎移入胚胎培养基中，于培养箱的时差系统摄像头下观察受精后第一至五天的胚胎卵裂情况，设置摄像头拍摄频率为5-15min/次；然后按如下步骤对胚胎进行等级分类：

(1)将胚胎分裂行为分为如下八种：

①正常分裂；②分裂异常；③不等大；④卵裂球碎裂；⑤大碎片；⑥异常胞质运动；⑦发育阻滞；⑧分裂次序紊乱；

(2)根据各分裂行为对囊胚形成的影响程度将胚胎的上述八种分裂行为归纳为如下两类：

I类分裂行为：正常分裂、异常胞质运动、不等大、大碎片对囊胚形成的影响程度小于50％；

II类分裂行为：发育阻滞、分裂异常、分裂次序紊乱、卵裂球碎裂对囊胚形成的影响程度大于等于50％；

(3)根据步骤(1)和步骤(2)将胚胎分为A、B、C、D、E、F六个等级：

A级：第一次(出现在受精后第一至二天，从一细胞至二细胞)、第二次(出现在受精后第二至三天，从二细胞至四细胞)、第三次卵裂(出现在受精后第三至四天，从四细胞至八细胞)均发生正常分裂行为的胚胎；

B级：第一、二、三次卵裂中至少发生一次除正常分裂行为外的I类分裂行为(异常胞质运动、不等大、大碎片)的胚胎；

C级：第一、二次卵裂发生I类分裂行为，第三次卵裂发生II类分裂行为(发育阻滞、分裂异常、分裂次序紊乱、卵裂球碎裂)的胚胎；

D级：第一次卵裂发生I类分裂行为，第二次卵裂时其中一个细胞(部分)发生II类分裂行为的胚胎；

E级：第一次卵裂发生I类分裂行为，第二次卵裂时两个细胞(全部)均发生II类分裂行为的胚胎；

F级：第一次卵裂发生II类分裂行为的胚胎；

其中，A级胚胎为最优选择的用于移植的胚胎；若没有A级胚胎则选择B级胚胎用于移植；若没有A级和B级胚胎，则选择C级胚胎用于移植；D、E、F级胚胎不被用于移植。

上述技术方案中，所述正常分裂是指胚胎的分裂情况为：受精后一至五天内，一次有丝分裂形成2个直径相差1/5以下的子细胞及占原有细胞体积10％以下的散在、无细胞核碎片；

分裂异常是指胚胎的分裂情况为：受精后一至五天内，一次有丝分裂形成3个或3个以上直径相差1/5以下的子细胞；

不等大是指胚胎的分裂情况为：受精后一至五天内，分裂后形成的2个子细胞直径相差1/5以上；

卵裂球碎裂是指胚胎的分裂情况为：受精后一至五天内，分裂形成的子细胞碎裂成4-10块直径为原有细胞直径1/3以下的无细胞核碎片或分裂过程中产生占原有细胞体积50％以上的散在、无细胞核碎片；