[发明专利]L‑氨基酸的制造方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种使用了棒状杆菌型细菌的L-氨基酸的制造方法。L-氨基酸作为动物饲料用的添加物、调味料或饮食品的成分、或氨基酸输液等在工业上很有用。

背景技术

L-氨基酸例如可通过使用了具有L-氨基酸生产能力的各种微生物的发酵法进行工业生产。作为利用发酵法的L-氨基酸的制造方法，例如可以举出：使用野生型微生物(野生株)的方法、使用由野生株衍生的营养缺陷株的方法、使用由野生株衍生为各种药剂抗性突变株的代谢调节突变株的方法、使用具有营养缺陷株和代谢调节突变株两者的性质的菌株的方法。

另外，近年来，利用重组DNA技术提高L-氨基酸生产能力的微生物被用于L-氨基酸的制造。作为提高微生物的L-氨基酸生产能力的方法，例如可以举出：增强编码L-氨基酸生物合成体系酶的基因的表达(专利文献1、专利文献2)、或增强碳源向L-氨基酸生物合成体系的流入(专利文献3)。

大肠杆菌(Escherichia coli)具有至少2种无机磷酸摄入体系(非专利文献1)。一方面为低亲和性的无机磷酸盐转运蛋白(low-affinity inorganic phosphate transporter；Pit)体系，另一方面为高亲和性的磷酸特异转运蛋白(high-affinity phosphate-specific transporter；Pst)体系。作为编码Pit体系的基因，已知有pitA基因及pitB基因。作为编码Pst体系的基因，已知有pstSCAB基因，pstSCAB基因的产物形成复合物，作为Pst体系发挥作用。然而，未知这些磷酸盐转运蛋白的活性和L-氨基酸生产的关联。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：美国专利第5,168,056号说明书

专利文献2：美国专利第5,776,736号说明书

专利文献3：美国专利第5,906,925号说明书

非专利文献

非专利文献1：R.M.Harris et al.,Journal of Bacteriology,Sept.2001,p5008-5014

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的课题在于，开发一种提高棒状杆菌型细菌的L-氨基酸生产能力的新型技术，提供一种有效的L-氨基酸的制造方法。

用于解决课题的手段

本发明人为了解决上述课题进行了潜心研究，结果发现，通过以磷酸盐转运蛋白的活性增大的方式对棒状杆菌型细菌进行修饰，可以提高棒状杆菌型细菌的L-氨基酸生产能力，完成了本发明。

即，本发明可如下例示。

[1]一种L-氨基酸的制造方法，其包括在培养基中培养具有L-氨基酸生产能力的棒状杆菌型细菌及从该培养基中采集L-氨基酸，其特征在于，

所述细菌以磷酸盐转运蛋白的活性增大的方式进行了修饰。

[2]如上述的方法，其中，通过使编码磷酸盐转运蛋白的基因的表达上升，磷酸盐转运蛋白的活性增大。

[3]如上述的方法，其中，所述基因为pitA基因。

[4]如上述的方法，其中，所述pitA基因为下述(a)或(b)中记载的DNA：

(a)具有序列号5或25所示的碱基序列的DNA；

(b)在严格的条件下可与由序列号5或25所示的碱基序列的互补序列或与可自所述互补序列制备的探针杂交的DNA，且其中所述可杂交的DNA编码具有磷酸盐转运蛋白活性的蛋白质。

[5]如上述的方法，其中，所述pitA基因为编码下述(A)或(B)中记载的蛋白质的DNA：

(A)具有序列号6或26所示的氨基酸序列的蛋白质、

(B)具有在序列号6或26所示的氨基酸序列中含有1或者多个氨基酸残基的取代、缺失、插入、或添加的氨基酸序列的蛋白质，且其中所述蛋白质具有磷酸盐转运蛋白活性。

[6]如上述的方法，其中，所述基因的表达通过提高该基因的拷贝数和/或修饰该基因的表达调节序列来上升。

[7]如上述的方法，其中，通过在所述细菌中保持编码磷酸盐转运蛋白的突变型pitA基因，磷酸盐转运蛋白的活性增大，所述磷酸盐转运蛋白具有相当于序列号6的246位的苯丙氨酸残基的氨基酸残基被取代为苯丙氨酸以外的氨基酸残基的突变。

[8]如上述的方法，其特征在于，相当于序列号6的246位的苯丙氨酸残基的氨基酸残基被取代为丝氨酸残基。