[发明专利]用于选择性富集靶细胞的方法、组合物、试剂盒及系统

权利要求书

1.一种用于从源自生物样品的异源细胞群体中选择性富集靶细胞亚群的方法，所述方法包括：

(a)使所述异源细胞群体与基底接触；

(b)在足以允许所述靶细胞亚群生长的条件下孵育所述异源细胞群体，其中，所述条件包括在高于大气压条件和低氧条件下孵育所述异源细胞群体，其中所述孵育导致所述靶细胞亚群的选择性富集。

2.根据权利要求1所述的方法，还包括：在所述靶细胞亚群的成员显示一种或多种形态特征和/或动力学性质时，鉴定所述靶细胞亚群的所述成员，其中所述一种或多种形态特征和/或动力学性质选自集落形成、增殖、与非靶细胞的表面积相比的大表面积、与非靶细胞对所述基底的粘附相比增高的对所述基底的粘附、快速的细胞分裂以及多核化。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述靶细胞亚群包含原代细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶细胞亚群包含选自下组的细胞：循环肿瘤细胞(CTC)、癌症干细胞(CSC)、来自实体瘤的细胞、造血干细胞(HSC)、原代神经元细胞、胎儿细胞、原代肝细胞、原代心肌细胞、内皮祖细胞(EPC)以及上皮祖细胞。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述生物样品包含实体组织样品。

6.根据权利要求2所述的方法，其中所述鉴定不包括使用抗体或多核苷酸标记物。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述生物样品包括体液或其衍生物。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述靶细胞亚群的成员以1个靶细胞/ml所述体液或其衍生物或更低的浓度存在。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述基底包括涂层，其中所述涂层选自GOL基底、GEL基底、一层或多层饲养细胞，以及它们的任意组合。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述基底的构造选自：单层构造、双层构造、中间层构造以及反转构造。

11.根据权利要求2所述的方法，进一步包括单独地分离和培养所述靶细胞亚群的所述成员。

12.根据权利要求11所述的方法，包括将所述靶细胞亚群的所述成员作为细胞培养物培养超过2周。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述低氧条件包括在小于10％的O₂水平下培养。

14.根据权利要求2所述的方法，其中所述高于大气压条件包括在15PSIA或更高的加压条件下培养所述成员。

15.根据权利要求2所述的方法，其中所述条件包括在包含能够调节细胞表面张力的化合物的细胞培养基中培养所述成员。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述化合物是Rho激酶抑制剂。

17.根据权利要求15所述的方法，其中所述化合物选自：

18.根据权利要求2所述的方法，其中所述条件包括将所述成员与能够提高所述成员中低氧诱导因子的表达的试剂一起培养。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述低氧诱导因子包括低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、低氧诱导因子-1β(HIF-1β)、低氧诱导因子-2α(HIF-2α)、低氧诱导因子-2β(HIF-2β)、低氧诱导因子-3α(HIF-3α)、低氧诱导因子-3β(HIF-3β)或其任意组合。

20.根据权利要求18所述的方法，其中所述低氧诱导因子包含与SEQ.ID.NO.1有至少70％或更高的同源性的氨基酸序列。

21.根据权利要求18所述的方法，其中所述多核苷酸与SEQ.ID.NO.2有至少70％或更高的同源性或互补性。

22.根据权利要求2所述的方法，其中所述鉴定包括：

(a)获得所述成员的图像；以及

(b)使用计算机可读介质将所述成员自动分类为属于所述靶细胞亚群。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述计算机可读介质被配置成基于所述靶细胞亚群的物理性质对参数进行整合，其中所述参数选自：细胞总大小、细胞形状、细胞运动、细胞核大小以及细胞分裂。

24.根据权利要求22所述的方法，其中所述计算机可读介质被配置为检测细胞的荧光标记。