[发明专利]用于疫苗制剂、诊断试剂盒的重组猪圆环病毒2(PCV-2)的抗原及其使用

说明书

技术领域

本专利申请的第一目的涉及在大肠杆菌(E.coli)中产生的纯化PCV-2重组衣壳蛋白作为疫苗抗原和诊断抗原。本专利申请的第二目的涉及由大肠杆菌产生的PCV2病毒样颗粒(VLP)作为疫苗抗原或诊断抗原。本专利申请的第三目的涉及抗PCV-2的重组疫苗，它含有大肠杆菌中产生的PCV2的纯化抗原或重组VLP抗原，添加至氢氧化铝作为佐剂。本专利申请的第四目的涉及用于量化PCV-2的疫苗抗原的捕获ELISA试剂盒。本文所述的疫苗抗原(目的1和2)和疫苗(目的3)可用于动物免疫，用在常规猪养殖体系的PCV-2相关疾病的防治规划中，并且代表市场上可获得的疫苗的替代物。ELISA试剂盒(目的4)可用于抗PCV-2的商业疫苗和/或实验疫苗的质量检验。上文提到的这些产品可用于制药或动物卫生领域。

背景技术

在1974年，猪圆环病毒(PCV)被首次识别/确定为存在于猪源性肾细胞培养中的持久污染物。不过，该病毒在二十世纪90年代后期仅与猪的致病性相关。它是首次披露于加拿大的断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)。由于在具有PMWS症状的动物中隔离出的该新型PCV和来自实验室细胞的那些污染物之间的遗传差异和免疫差异，这两种病毒分别被命名为猪圆环病毒-2(PCV-2)和猪圆环病毒-1(PCV-1)(SilvaJunior,A.,Carvalho,O.V.,Bulos,L.H.S.,Fietto,J.L.R.,Moraes,M.P.,Almeida,M.R.Porcinecircovirus2:immunopathogenesisandrecentdevelopmentsinvaccines；Worldjournalvaccine，v.2，p.96-104，2012)。

由于PCV-2与猪中除PMWS之外的不同的症状群相关，术语猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)在2006年由美国猪兽医协会(AASV)引入，来分类所有的这些综合症。其中包括侵袭猪的肠炎、繁殖失败、皮炎和肾病，主要在生长期和肥育期。最近，在2011年，披露了以急性肺水肿为特征的新综合症，影响幼龄动物并且针对PCV-2接种疫苗，导致约20％的死亡率(Cino-OzunaA.G.,HenryS.,Hesse,R.,Nietfeld,J.C.,Bai,J.,Scott,H.M.,Rowland,R.R.R.Characterizationofanewdiseasesyndromeassociatedwithporcinecircovirustype2inpreviouslyvaccinatedherds.JournalofClinicalMicrobiology，V49，p.2012-2016，2011)。目前，PCV-2呈全球分布并且PCVAD在大多数养殖国家呈地方性流行。

并非所有受PCV-2感染的动物都表现这些疾病的明显临床症状。因此，为了进行准确的诊断，除了通过实验室技术如聚合酶链反应(PCR)、免疫组织化学(IHC)以及其它技术检测动物中的病毒外，还需要观察相容性临床症状的存在和特征性显微病变的存在(SilvaJunior,A.,Carvalho,O.V.,Bulos,L.H.S.,Fietto,J.L.R.,Moraes,M.P.,Almeida,M.R.Porcinecircovirus2:immunopathogenesisandrecentdevelopmentsinvaccines；Worldjournalvaccine，v.2，p.96-104，2012)。

由于患病的动物通常出现淋巴细胞减少，通过条件性病原体所致的继发性感染是时常发生的，这增加了PCVAD控制的重要性。从这个意义上说，研究提出PCVAD的形成与病毒相互作用以及其它条件性传染因子直接相关，其中动物的免疫系统证实了这些疾病的多因素性质(SilvaJunior,A.,Carvalho,O.V.,Bulos,L.H.S.,Fietto,J.L.R.,Moraes,M.P.,Almeida,M.R.Porcinecircovirus2:immunopathogenesisandrecentdevelopmentsinvaccines；Worldjournalvaccine，v.2，p.96-104，2012)。