[发明专利]用于增加的重组蛋白产生的制剂和方法

权利要求书

1.哺乳动物细胞培养基制剂，其包含约3.5g/L或更多的甘露糖和约1.5mM至约9.5mM范围内的钙中的至少一者。

2.权利要求1的制剂，其中所述培养基包含约3.5g/L或更多的甘露糖和小于约1.5mM或大于约9.5mM的钙。

3.权利要求1的制剂，其中所述培养基包含小于约3.5g/L的甘露糖和约1.5mM至约9.5mM范围内的钙。

4.权利要求1的制剂，其中所述培养基包含约4g/L至约5g/L范围内的甘露糖。

5.权利要求2的制剂，其中所述培养基包含约4g/L至约5g/L范围内的甘露糖。

6.权利要求1的制剂，其中所述培养基包含约2mM至约5mM范围内的钙。

7.权利要求3的制剂，其中所述培养基包含约2mM至约5mM范围内的钙。

8.权利要求1的制剂，其中所述制剂包含1:1比率的DMEM/F12且包括约4g/L至约5g/L范围内的甘露糖和约2mM至约5mM范围内的钙中的至少一者。

9.在细胞培养物中产生重组蛋白的方法，其包括：

提供表达重组蛋白的细胞；和

在细胞培养基中培养所述细胞，所述细胞培养基包括约3.5g/L或更多的甘露糖和约1.5mM至约9.5mM范围内的钙中的至少一者。

10.权利要求9的方法，其中所述培养基包含约3.5g/L或更多的甘露糖和小于约1.5mM或大于约9.5mM的钙。

11.权利要求9的方法，其中所述培养基包含小于约3.5g/L的甘露糖和约1.5mM至约9.5mM范围内的钙。

12.权利要求9的方法，其中所述培养基包含约4g/L至约5g/L范围内的甘露糖。

13.权利要求10的方法，其中所述培养基包含约4g/L至约5g/L范围内的甘露糖。

14.权利要求9的方法，其中所述培养基包含约2mM至约5mM范围内的钙。

15.权利要求11的方法，其中所述培养基包含约2mM至约5mM范围内的钙。

16.权利要求9的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。

17.权利要求16的方法，其中所述哺乳动物细胞选自BHK细胞、CHO细胞、HKB细胞、HEK细胞和NS0细胞。

18.权利要求17的方法，其中所述哺乳动物细胞是BHK细胞。

19.权利要求9的方法，其中所述细胞表达凝血途径重组蛋白。

20.权利要求19的方法，其中所述细胞表达重组人因子VIII(rhFVIII)、或其变体。

21.权利要求20的方法，其中所述变体因子VIII是遗传变体。

22.权利要求21的方法，其中所述遗传变体是B结构域缺失的FVIII。

23.权利要求20的方法，其中所述变体因子VIII是聚乙二醇化的FVIII。

24.权利要求9的方法，其中所述细胞是表达重组因子VIII的BHK细胞，其中所述培养基包含1:1比率的DMEM/F12且包括约4g/L至约5g/L范围内的甘露糖和约2mM至约5mM范围内的钙中的至少一者。