[发明专利]涉及mRNA转染的治疗组合物和方法

说明书

政府基金

本发明在NIH/NIDCR资助的基金号1R01DE021206的政府支持下完成。政 府享有本发明的某些权利。

相关申请的交叉引用

本申请要求2013年1月11日提交的美国临时专利申请系列号61/751,504的 优先权，其通过引用纳入本文。

发明内容

在一个方面，本公开内容描述一种抑制细胞增殖的方法。一般而言，所述 方法包括：将参与抑制细胞增殖的多肽的编码mRNA引入上皮细胞，并允许所 述细胞足量表达所述多肽到能有效降低所述细胞在锚着非依赖性环境中增殖 的可能性。在一些实施方式中，所述多肽可包括：钙卫蛋白(与S100A9复合的 S100A8；S100A8/A9)、S100A8或S100A9。

在另一个方面，本公开文本描述一种抑制细胞感染的方法。一般而言，所 述方法包括将参与先天免疫中的多肽的编码mRNA引入细胞，并允许所述细胞 足量表达所述多肽到能有效降低所述细胞被病原体感染的可能性。在一些实施 方式中，所述多肽可包括普抑素(cathelicin)抗微生物蛋白(CAMP)、钙卫蛋白、 S100A8、S100A9、β-防御素、S100A7、分泌性白细胞抑制剂、脂质运载蛋白2 或溶菌酶。

在上文概述的某一方面的一些实施方式中，所述mRNA可包括稳定化部分， 例如，5'帽或3'延伸。在一些实施方式中，所述细胞可以是粘膜上皮细胞。

在另一个方面，本公开内容描述一种组合物，所述组合物一般包含编码多 肽的mRNA和体内递送载剂。

在一些实施方式中，所述多肽可抑制上皮细胞增殖。在这些实施方式的一 些中，所述多肽可包括钙卫蛋白、S100A8或S100A9。

在其它实施方式中，所述多肽可参与先天免疫。在这些实施方式的一些中， 所述多肽可包括普抑素抗微生物蛋白(CAMP)、钙卫蛋白、S100A8、S100A9、 β-防御素、S100A7、分泌性白细胞抑制剂、脂质运载蛋白2或溶菌酶。在一些 实施方式中，所述mRNA可包括稳定化部分，例如，5'帽或3'延伸。

上述归纳并不意在描述本发明的各个公开的实施方式或各个实现方式。下 文的说明内容更具体地例举说明性实施方式。在贯穿本申请的一些内容处，通 过一系列示例来提供指导，这些示例可以不同组合应用。在每种情况中，所述 的列表仅表示代表性的组，并不应被解释为穷举列表。

附图简要说明

图1.用ARCA-加帽的CAMPmRNA或CE加帽的CAMPmRNA转染后的KB 细胞的CAMP蛋白表达。(A)KB细胞用ARCA、CE帽0或帽1-加帽的CAMPmRNA 转染后的CAMP蛋白表达。上图，代表性的Western印迹。下图，定量说明，其 中，八小时的ARCA帽表达设置为100。采用材料和方法中描述的QuantityOne 分析法进行分析之后，采用若干加帽法转染后的蛋白质表达以相对于100的方 式表示。(B)在用ARCA-加帽的CAMP转染后，随时间变化的CAMP蛋白表达。 如图(A)中所示，ARCA-加帽的CAMPmRNA转染之后的CAMP蛋白表达采用 Western印迹(上图)检测，并在下图中以相对于八小时的水平(设为100)的方式表 示。图(A)和(B)中，误差线显示3～6个独立实验的平均值±SD。

图2.KB细胞用ARCA-加帽的S100A8、S100A9、A8-IRES-A9和A8-nIRES-A9 mRNA转染后的S100A8和S100A9蛋白质表达。(A)用S100A8mRNA转染后的 KB细胞S100A8蛋白质表达，采用Western印迹检测(显示代表性图像)并如图1中 那样定量。进行相同的实验以确定：用S100A8/S100A9mRNA共转染后的KB细 胞的(B)S100A9蛋白；(C)S100A8和S100A9蛋白的表达时程；用A8-IRES-A9 mRNA转染后的KB细胞的(D)S100A8和S100A9蛋白质的表达时程；和用 A8-nIRES-A9mRNA转染后的(E)S100A8和S100A9蛋白的表达时程。将mRNA 转染后8小时的蛋白质表达设置为100。误差线显示3～6个独立实验的平均值 ±SD。